利用杂交和增强解离的高精度基因组学分析平台的方法及装置

摘要

根据本发明的方法及装置可应用于捕捉/浓缩、基因表达谱和靶向测序。本发明所提供的方法是通过控制表面化学来提高微阵列和/或其它形式的依靠核酸杂交和解链曲线分析的基因组学分析方法的准确度和严谨度。所述方法包括在微阵列玻片的表面或出于相似目的的其它形式（如微珠）的表面形成一带正电的表面或表面涂层，以在一定程度上增强解链曲线分析，使其可检测或区分核酸的结合配体之间序列的细微变化。还公开了一种改进的微阵列阅读器，以收集微阵列玻片上的解链曲线数据。解链曲线分析的准确度或分辨率足以区分完全匹配的双链DNA的解链和具有序列中最小可能的变化—一对碱基错配的双链DNA的解链。

主权项

一种捕捉/浓缩测试样品中所关注的靶多核苷酸序列、检测其是否存在、测定其数量或对其进行验证的方法，包括以下步骤：a）在分析介质中混合下述物质形成反应混合物：(i)含有结合至固体颗粒上的第一探针的第一试剂，所述第一探针包括与靶核苷酸序列的所选链段的两个独立链段中的第一个链段互补的第一单链核酸片段，其中，所述固体颗粒为带有正电荷的固体颗粒；以及(ii)可能含有靶核苷酸序列的测试样品的等分试样，其中，所述第一探针与靶多核苷酸序列的相互排斥部分互补；b)对所述反应混合物施行变性条件，使得样品中的靶多核苷酸序列变成单链；c)将所述反应混合物在杂交条件下进行温育，以使第一探针和靶多核苷酸序列的所选链段的第一链之间发生杂交；从而，在靶多核苷酸的存在下，几乎所有的第一探针都杂交到靶多核苷酸序列的所选链段的第一链上，形成结合的靶多核苷酸序列；d)将所述反应混合物暴露于解离条件下；并且e)监控所述反应混合物，其中解离与在结合的靶多核苷酸的存在下的变化相关，提供解离曲线分析；从而，带正电荷的固体颗粒在一定程度上增强了用于分析的热解特性，使其可检测，量化或区分靶多核苷酸和第一探针的核酸杂交体的细微序列差异，其中，所述细微序列差异可小至一个碱基对。