一种基于荧光PCR检测TYMS基因多态性的方法

摘要

本发明提供一种基于荧光PCR快速准确检测TYMS基因1494del6多态性的方法。该方法针对TYMS基因1494del6多态性所对应的两条等位基因，分别设计等位基因特异性引物，结合SYBR green技术，在荧光PCR完成后便可以通过扩增曲线准确判断样本TYMS基因1494del6多态性位点的具体基因型。本发明设计的特异性引物具有很高的位点特异性；检测灵敏度高；节省耗材和时间。

主权项

一种基于荧光PCR检测TYMS基因多态性的方法，包括以下环节：(1)等位基因特异性引物的设计：针对TYMS基因1494del6多态性对应的两条等位基因分别设计等位基因特异性引物，作为上游引物，序列如下：+6bp:5’‑GTAGAGTGTGGTTATGAACTTTAA‑3’‑6bp:5’‑GTAGAGTGTGGTTATGAACTTTGT‑3’针对两条等位基因设计一条共通的下游引物，序列如下：Rp:5’‑ACAAAGCGTGGACGAATG‑3’(2)模板的制备:提取被测样本的基因组DNA；(3)实时定量PCR:针对步骤(1)中的两条特异性上游引物和共通下游引物，建立被测样本的检测体系；对被测样本同时设置两个反应体系；在第一个反应体系中，加入+6bp特异性引物、下游引物、2×SYBR Green Mastermix、被测样本基因组DNA，PCR等级的H₂O补足体积；在第二个反应体系中，加入‑6bp特异性引物、下游引物、2×SYBR Green Mastermix、被测样本基因组DNA，PCR等级的H₂O补足体积；两个反应体系中对应组分的量相等；将配制好的两个反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增，观察被测样本在两个反应体系中扩增曲线，判断得出被测样本的基因型。