一种登革病毒/黄热病毒/西尼罗病毒/基孔肯雅病毒鉴别检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种四种虫媒性传播病原体鉴别检测的试剂盒，特别是涉及一种利用多重实时荧光聚合酶链式反应技术检测登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒的试剂盒。本试剂盒主要包括RT-PCR反应液、引物探针混合液、RT-PCR反应酶系、DEPC H₂O，以及分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。由于本试剂盒能准确区分登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒以及基孔肯雅病毒，可广泛应用于由上述虫媒传播病毒所引起的的鉴别诊断、检验检疫、疫情防控等多个领域。

主权项

一种登革病毒／黄热病毒／西尼罗病毒／基孔肯雅病毒鉴别检测试剂盒，包括：1)RT‑PCR反应液、引物探针混合液、RT‑PCR反应酶系、DEPC H₂O，阴性质控品、阳性质控品和2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中引物探针混合液由一对登革病毒特异性的正、反向引物，一对黄热病毒特异性的正、反向引物，一对西尼罗病毒特异性的正、反向引物，一对基孔肯雅病毒特异性的正、反向引物，一条登革病毒特异性的探针，一条黄热病毒特异性的探针，一条西尼罗病毒特异性的探针，一条基孔肯雅病毒特异性的探针组成，其特征在于：登革病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑GATTCTCAAAAGGATTGCTCTC‑3’和5'‑TTGTTAGGAATGCTATGAAGGC‑3’，登革病毒特异性的探针的序列是5’‑CATCA+CCA+ATT+TCA+TGG+GTC‑3’，碱基前含“+”表示该碱基为LNA修饰，且探针的两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；该对引物探针可检测登革病毒所有亚型，包括I型、II型、III型及IV型；黄热病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5'‑AAACAAAACAAATTGGAAACAG‑3’和5'‑TTTTCCAGTCAAAATGTTGAAC‑3’，黄热病毒特异性的探针的序列是5’‑CTTG+AAC+Acc+TCT+TGA+AGG+TCC‑3’，碱基前含“+”表示该碱基为LNA修饰，且探针的两端分别结合有荧光发生基团Cy5和荧光淬灭基团Eclipse；西尼罗病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5′‑CCGCCACCGGAAGTTGA‑3′和5′‑CGAGACGGTTCTGAGGGCT‑3′，西尼罗病毒特异性的探针的序列是5′‑CAA+CCCC+AGGA+GGACT‑3′，碱基前含“+”表示该碱基为LNA修饰，且探针的两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团Eclipse。基孔肯雅病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5′‑GTGGGAGTACCGTATAAGACTC‑3′和5′‑CAGACAGAAGCTCCATCTCC‑3′，基孔肯雅病毒特异性的探针的序列是5′‑CTA+CAG+CCC+CAT+GGT+ACT‑3′，碱基前含“+”表示该碱基为LNA修饰，且探针的两端分别结合有荧光发生基团Texas Red和荧光淬灭基团Eclipse。