发明名称 |
NIK抑制剂基于细胞的筛选测定 |
摘要 |
本发明涉及用于筛选和鉴定NIK蛋白质抑制剂的基于细胞的测定。根据本发明的方法允许鉴定抑制与IKK1磷酸化有关的NIK活性的化合物。该测定组合使用经转染的人胚肾(HEK)细胞与使用“受体”珠和“供体”珠的非放射性、均相接近测定。 |
申请公布号 |
CN103703369A |
申请公布日期 |
2014.04.02 |
申请号 |
CN201280037311.4 |
申请日期 |
2012.07.26 |
申请人 |
默克专利股份公司 |
发明人 |
R.霍夫特范休斯杜伊南;S.格尔 |
分类号 |
G01N33/50(2006.01)I;G01N33/542(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/50(2006.01)I |
代理机构 |
中国专利代理(香港)有限公司 72001 |
代理人 |
李慧惠;梁谋 |
主权项 |
用于鉴定抑制NIK活性的化合物的方法,其包括:(a)提供在培养基中含有编码NIK的DNA和编码IKK1‑KD的DNA的HEK细胞(经转染的HEK细胞);(b)在37℃ +/‑ 2℃的温度下在5% CO2的存在下,使所述经转染的HEK细胞连同和不连同待测试的候选分子温育24小时;(c)去除所述培养基;(d)裂解所述细胞;(e)将受体复合物随后将供体复合物加入所述细胞裂解产物中;(f)用激光照射激发所述细胞裂解产物,和(g)使用基于珠的发光接近检测系统,测量细胞裂解产物被激光激发后产生的信号,其中得自细胞裂解产物的信号的减少或不存在指示NIK介导的IKK1‑KD磷酸化的抑制,所述细胞裂解产物来源于在测试化合物的存在下培养的经转染的HEK细胞,并且其中所述受体复合物包含分子包被的珠和与所述IKK1‑KD蛋白质结合的结合配偶体,并且所述供体复合物包含分子包被的珠和与所述IKK1‑KD蛋白质结合的结合配偶体。 |
地址 |
德国达姆施塔特 |