荧光定量PCR检测巨细胞病毒gH基因分型试剂盒及应用

摘要

本发明提供的一种荧光定量PCR检测巨细胞病毒gH分型的试剂盒，由定量PCR反应液管、gH1型标准品管、gH2型标准品管、阳性对照品管、阴性对照品管、病毒DNA抽提裂解液管、操作说明书、盒体组成，盒体设有容器孔，PCR反应液由单管分装，矩阵排列。本发明运用实时荧光定量PCR技术，采用双特异荧光探针，实现了巨细胞病毒gH基因分型的快速鉴定，有效地解决了以往巢式PCR加限制性内切酶分析（RFLP）鉴定巨细胞病毒gH基因型方法繁琐的问题。为临床上巨细胞病毒gH基因型的分型提供了简便可靠的检测手段及实验依据。

主权项

一种荧光定量PCR检测巨细胞病毒gH基因分型试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液管（1）、gH1型标准品管（2）、gH2型标准品管（3）、阳性对照品管（4）、阴性对照品管（5）、病毒DNA抽提裂解液管（6）、操作说明书（7）、盒体组成（8）组成，盒体(8)设有容器孔，分别放置PCR反应液管（1）、gH1型标准品管（2）、gH2型标准品管（3）、阳性对照品管（4）、阴性对照品管（5）、病毒DNA抽提裂解液管（6），定量PCR反应液管（1）由单管分装，矩阵排列，定量PCR反应液管（1）装有PCR缓冲液，Mgcl2，dNTPs，巨细胞病毒gH基因通用上游引物，巨细胞病毒gH基因通用下游引物，荧光探针，Taq DNA聚合酶；其中：上游引物序列为：5’‑TGTTTTCACGCAGGAAGCGG‑3’，下游引物序列为：5’‑TGGATCACGCCGCTGAACC‑3’，gH1型探针为：5’‑FAM‑CATCCGAAGCGCTGGACCCTCACG‑BHQ1‑3’，gH2型探针为：5’‑HEX‑TATCCGAACCGCTGGACAAAGCG‑BHQ1‑3’；gH1型标准品序列为：tgttttcacgcaggaagcggatgggtctcccgtaggtgttgagtagtaggtgaaatgcgtgagggtccagcgcttcggatgcggcgtccgcgccatatcgttgcgaaggtaggtgactgaggaggtagacggtgaagacagtgaggtagggggggaggccgggccgcatagcgcggctgcgccgctgggttcagcggcgtgatcca；gH2型标准品序列为：tgttttcacgcaggaagcggatgggtctcccgtaggtgttgagcagtaggtgaaacgctttgtccagcggttcggatatggcttctgcgccatatcgtgacgaaagtaggtggctgaggagacagacggcgaggacgatgaggtaggaggggaggcctggccgcatagcgcggccgcgccgctgggttcagcggcgtgatcca；病毒DNA抽提裂解液管（6）装有10mmol/L Tri‑HCL,pH 7.6 5mmol/LEDTA,0.5%SDS。