主权项 |
鉴定一个或多个多态性的非诊断性方法,所述方法包括步骤:a)提供第一目的核酸样品;b)对第一目的核酸样品进行复杂度降低以提供第一核酸样品的第一文库;c)用第二或更多目的核酸样品连续地或同时地进行步骤a)和b),以获得第二或更多目的核酸样品的第二或更多文库;d)测序第一文库和第二或更多文库的至少一部分,其中测序在固体支持物上进行;e)比对在步骤d)中获得的序列;f)确定在步骤e)的比对中第一核酸样品和第二或更多核酸样品间的一个或多个多态性;g)用在步骤f)中确定的所述一个或多个多态性设计检测探针;h)提供目的测试样品核酸;i)对目的测试样品核酸进行步骤b)的复杂度降低以提供测试样品核酸的测试文库;j)用在步骤g)中设计的检测探针对测试文库进行高通量筛选以鉴定在步骤f)中确定的多态性的存在或不存在;其中步骤(b)的复杂度降低是通过下述进行的:‑用至少一种限制性核酸内切酶消化核酸样品以将其片段化为限制性片段;‑用具有可与限制性片段的一个或两个末端相连接的一个末端的至少一种合成的双链寡核苷酸接头连接获得的限制性片段,以产生接头‑连接的限制性片段;‑将所述接头‑连接的限制性片段与一个或多个寡核苷酸引物在杂交条件下接触;和‑通过所述一个或多个寡核苷酸引物的延伸来扩增所述接头‑连接的限制性片段,其中所述一个或多个寡核苷酸引物的至少一个包括具有与在所述接头‑连接的限制性片段的末端处的链的末端部分的核苷酸序列相同的核苷酸序列,包括参与所述限制性核酸内切酶的目标序列的形成的核苷酸并且包括存在于接头中的核苷酸的至少一部分。 |