一种鉴定菊花远缘杂交胚胎败育相关蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种鉴定菊花远缘杂交胚胎败育相关蛋白的方法，属于菊花育种与蛋白质组学领域。该方法包括：以栽培小菊作母本，野菊菊花脑作父本开展远缘杂交工作。授粉后不同时间剪下已授粉的花序，分别取形态发育完整、饱满的子房和形态发育异常、不饱满的子房，取样后立即在液氮中速冻后保存于-80℃冰箱中。样品用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质，保存于-80℃。最后运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析，获得与菊花远缘杂交育种中胚胎败育的相关蛋白。本发明针对菊花及其近缘属野生种，提供了一种快速、准确鉴定菊花胚胎发育过程中不同发育阶段的不同形态的胚胎差异蛋白，为解决菊花远缘杂交胚胎败育提供研究基础。

主权项

一种鉴定菊花远缘杂交胚胎败育相关蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：      1）以栽培菊花作母本，野菊作父本进行远缘杂交，分别于授粉后12 d和18 d剪下已授粉的花序进行取样，授粉后12 d时取发育正常、饱满的子房，授粉后18 d时分别取发育正常、饱满的子房及发育异常、不饱满的子房；取样后立即在液氮中预处理1~2 h，然后于‑80℃贮存；2）将步骤1）所取得的样品分别用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质，得到授粉后12 d发育正常饱满子房的蛋白质、授粉后18 d发育正常饱满子房的蛋白质和发育异常不饱满子房的蛋白质，于‑80℃保存；3）将授粉后12 d发育正常饱满子房的蛋白质、授粉后18 d发育正常饱满子房的蛋白质和发育异常不饱满子房的蛋白质分别运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析。