一种蛋白酶在皮革处理中的可视化跟踪检测方法

摘要

一种蛋白酶在皮革处理中的可视化跟踪检测方法，首先在碱性条件下用异硫氰酸荧光素对蛋白酶进行标记得到FITC标记酶；然后将标记酶在室温避光条件下对剪掉毛的皮块进行处理，将标记酶处理后皮块制备切片在荧光显微镜下观察酶在皮中的分布状态。本发明利用FITC的强荧光特性实现对酶在皮中的渗透及其对皮作用程度的检测，根据处理时间的不同获得酶在皮中的渗透方式：酶首先通过毛孔及毛囊周围渗透进入皮中，然后逐渐扩散于皮基质中对纤维间质蛋白作用。本发明为酶在制革中的应用提供理论支持，根据制革不同处理阶段皮胶原纤维结构，选择合适分子量的酶处理皮胶原，通过分析酶在皮胶原中的渗透性和作用程度，达到酶对皮蛋白及胶原的可控处理。

主权项

一种蛋白酶在皮革处理中的可视化跟踪检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以pH值为7.0～9.0的缓冲液为溶剂，分别配制酶溶液和异硫氰酸荧光素溶液；2）向酶溶液中滴加异硫氰酸荧光素溶液混合均匀，使得到的反应体系中酶与异硫氰酸荧光素的质量比为100：（0.5～5.0），然后于4℃下避光反应10h，得到反应液；3）将反应液装入分子截流范围小于酶分子量的透析袋中，然后放入pH值为7.0～9.0的缓冲液中震荡透析直到透析得到的析出液中不存在游离的异硫氰酸荧光素，停止透析，此时透析袋中剩余物为FITC标记酶溶液；4）将透析袋中的FITC标记酶溶液取出后用pH值为7.0～9.0的缓冲液稀释，得到浓度为0.4‑1mg/mL稀释后的FITC标记酶溶液；向稀释后的FITC标记酶溶液中放入剪掉毛的皮块，在水浴震荡器中于室温避光震荡，震荡结束后取出处理过的皮块，然后用蒸馏水冲洗处理过的皮块表面以除去游离的异硫氰酸荧光素，得到FITC标记酶处理后的皮块；将FITC标记酶处理后的皮块用冷冻切片机冷冻切片，并将切片封固在载玻片上用以在荧光显微镜下观察酶在皮中的分布状态。