一种用单壁碳纳米管缩短彩色马蹄莲组培繁殖周期的方法

摘要

本发明提供一种用单壁碳纳米管缩短彩色马蹄莲组培繁殖周期的方法，对彩色马蹄莲的规模化繁殖和生产、满足市场对彩色马蹄莲种苗的需要具有一定的技术指导作用。具体的步骤包括：A.外植体消毒，B.丛生芽诱导，C.丛生芽继代培养，D.壮苗，E.生根培养。采用植物组织培养的方法，在丛生芽的继代培养和壮苗培养的培养基中添加一定浓度的单壁碳纳米管，并同时提高蔗糖的浓度，可以加快丛生芽的分化速度，促进丛生芽的壮苗和生根培养，缩短彩色马蹄莲组培苗的出瓶周期，从而在更短的时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为彩色马蹄莲产业化提供大量的植物材料。

主权项

一种用单壁碳纳米管缩短彩色马蹄莲组培繁殖周期的方法，其特征在于：A外植体消毒：选取直径约2cm的健康的彩色马蹄莲小种球，用2g/L多菌灵水溶液浸泡15min后，浅埋于经高压灭菌处理后的湿润的细沙基质中，在光照3000lx(12h/d)、(25±1)℃的条件下进行预培养，令种球萌发；7～10d后，选取芽长约1cm的种球，经表面消毒后接种。具体消毒方法为：用软毛刷将块茎刷洗干净，避免损伤顶芽，削去块茎表皮，在安利洗涤剂溶液中振荡20min，再用2g/L多菌灵溶液浸泡1h，自来水冲洗40min，转入超净台，切除块茎表层，保留直径约1.5cm的带芽块茎，75％酒精浸泡15S，无菌水冲洗1次，而后以0.2％的升汞消毒15～20mmin。处理完毕后，无菌水冲洗6～8次，无菌吸水纸吸干水分。B芽诱导培养：将消毒好的彩色马蹄莲种球切成直径约1cm的带芽小块，接种至下列培养基中：MS基本培养基，蔗糖30g/L，生长激素0.1～0.2mg/L，细胞分裂素0.4～0.5mg/L，pH5.8；在培养温度25±1℃，光照强度为1000～3000lx，光照时间为12～16h下进行光照培养20～30天至分化出芽。30d后继续继代培养，使丛生芽增殖。C丛生芽继代培养：将诱导出的丛生芽接种到下列培养基中，进行继代培养：蔗糖30g/L，植物生长激素0.1～0.2mg/L，细胞分裂素0.4～0.5mg/L，pH5.8；培养温度25±1℃，光照强度为2000～3000lx，光照时间为12～16h，进行光照培养20‑25天，使丛生芽增殖。D壮苗：将诱导的丛生芽进行单株切割，保留1‑2cm茎段，接种至下列培养基中：MS基本培养基，蔗糖35g/L，生长激素0.1～0.2mg/L，细胞分裂素0.4～0.5mg/L，琼脂5.6g/L，单壁碳纳米管40mg/L，pH5.8；培养温度25±1℃，光照强度为2000～3000lx，光照时间为12～16h，进行光照培养10～15天。20d后进行生根培养。E生根培养：将诱导的丛生芽进行单株切割，保留2‑3cm茎段，接种至下列培养基中：MS基本培养基，蔗糖35g/L，生长激素0.5～0.6mg/L，细胞分裂素0.1～0.2mg/L，琼脂5.6g/L，单壁碳纳米管40mg/L，pH5.8；培养温度25±1℃，光照强度为2000～3000lx，光照时间为12～16h，进行光照培养10～15天。20d后即可进行炼苗移栽。所述的缩短彩色马蹄莲组培繁殖周期的方法的延伸技术方案包括：所涉及到的植物生长激素包括萘乙酸(NAA)0.1～0.2mg/L，吲哚丁酸(IBA)0.1～0.2mg/L，6‑卞基腺嘌呤(6‑BA)0.4～0.5mg/L。