肺孢子菌的特异PCR检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明提供了一种肺孢子菌的特异PCR检测试剂盒，包括DNA裂解液，PCR反应液，阳性对照，阴性对照，并通过样本的预处理，样本DNA的提取，PCR扩增及PCR产物观察步骤提供了肺孢子菌的特异PCR检测试剂盒的检测方法，本发明的PCR检测试剂盒设计严谨，同时，此检测方法操作简单快速，灵敏性高，特异性强，结果判定准确客观。

主权项

1.肺孢子菌的特异PCR检测试剂盒，其特征在于：包括，DNA裂解液，PCR反应液，阳性对照，阴性对照；其中，所述DNA裂解液成分为：Nacl，浓度为120～200mM；Tris-HCl，pH为8.0，浓度为10～30mM；EDTA，浓度为1～20mM；SDS，体积浓度为2%；蛋白酶K，浓度50～150μg/μl；所述PCR反应液成分为：10×反应缓冲液：包含浓度为300～600mM的KCl，浓度为50～150mM的Tris-HCl，pH为9.0，温度为25℃，体积浓度为0.5～1.5%的Triton®X-100；MgCl₂，浓度为15～30mM；dNTP，浓度为2～3mM；特异性引物1，浓度为1～20μM；特异性引物2，浓度为1～20μM；Taq酶，活性为1～100U/μl；其中特异性引物1为PCPF，特异性引物2为PCPR，碱基序列分别为：5′-GATGGCTGTTTCCAGTACTC-3′、5′-GTGTACGTTGCAAAAGCCCA-3′；所述阳性对照为肺孢子菌线粒体大亚基rRNA的一段特异性片段克隆得到的质粒；所述阴性对照为空白去离子水。