| 主权项 |
一种检测食品中脂肪酸氯丙醇单双酯含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（一）样品的处理称取待测食物样品适量于塑料离心管中，加入混合内标溶液，超声混合均匀；（二）萃取分离上柱：将混合均匀的样品和内标溶液，转入固相萃取柱中，并两次以正己烷洗涤离心管，将洗涤液一并转入固相萃取柱中；洗脱：以正己烷为洗脱溶剂将脂肪酸氯丙醇双酯洗脱下来，用玻璃试管收集洗脱液，然后再用正己烷—乙酸乙酯混合溶剂洗脱脂肪酸氯丙醇单酯，用另一支玻璃试管收集该洗脱液；（三）碱水解处理分别将步骤（二）所得洗脱液置于氮气流下缓缓浓缩至近干，加入甲基叔丁基醚—乙酸乙酯溶液溶解残渣，再加入硫酸丙醇溶液，然后加入水解试剂水解1 min后，迅速加入冰乙酸溶液，充分涡旋混匀，然后加入正己烷脱脂，充分涡旋后静置，待明显分层后去除正己烷层，再用正己烷萃取1次，弃去正己烷相，水相供衍生化用；（四）衍生化处理向上述净化液中加入衍生化试剂，涡旋混匀后于80 ℃下衍生20 min，待其冷却至室温后，加入乙酸乙酯充分涡旋，静置分层后，将乙酸乙酯层转移至另一试管中，再重复萃取2次，合并3次萃取液，于氮气流下缓慢吹干，残余物用异辛烷溶解后，以12000 转/min 的速度离心5 min，取上清液供GC‑MS进样分析；（五）气相色谱‑质谱联用仪分析分别将步骤（三）、（四）和步骤（五）所得上清液通过气相色谱‑质谱联用仪进行检测，气相色谱‑质谱联用仪所需条件如下：色谱柱：DB‑5MS毛细管柱；进样口温度：280 ℃；柱始温：80 ℃保持1 min，再以10 ℃/min的速度程序升温至190 ℃，最后以40 ℃/min的速度升至300 ℃，保持5 min；载气：高纯氦，流速3.0 mL/min；进样方式：不分流进样；进样体积：1 μL；离子源：电子轰击离子源(EI)；电子倍增器增益：+ 250V；灯丝电流：100 μA；阱温度：230 ℃；传输线温度：250 ℃；歧盒温度：50 ℃；溶剂延迟：3 min；质谱采集时间：3‑29.75 min；扫描质量数范围：90‑300；扫描速率：0.65 s/次；脂肪酸3‑氯‑1,2‑丙二醇和脂肪酸2‑氯‑1,2‑丙二醇的定量离子分别为m/z147和m/z196，内标d5‑3‑氯‑1,2‑丙二醇和d5‑脂肪酸2‑氯‑1,2‑丙二醇的定量离子分别为m/z150和m/z201；（六）标准曲线的制备分别准确称取适量脂肪酸3‑氯‑1,2‑丙二醇单酯，脂肪酸3‑氯‑1,2‑丙二醇二酯，脂肪酸2‑氯‑1,3‑丙二醇单酯，脂肪酸2‑氯‑1,3‑丙二醇二酯标准品于10ml容量瓶中，用乙酸乙酯溶解后定容至刻度，充分混匀得到标准储备液，于‑24℃冰箱中放置保存；再分别取适量储备液用正己烷稀释成25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml、500ng/ml的标准工作液，各加入与样品相同量的的内标溶液, 然后按照步骤（三）、（四）和（五）进行处理分析；（七）定量方法以标准品脂肪酸3‑氯‑1,2‑丙二醇单酯，脂肪酸3‑氯‑1,2‑丙二醇二酯，脂肪酸2‑氯‑1,3‑丙二醇单酯，脂肪酸2‑氯‑1,3‑丙二醇二酯与各自内标峰面积比值和进样质量计算线性回归方程，通过该方程对样品中的脂肪酸3‑氯‑1,2‑丙二醇单酯，脂肪酸3‑氯‑1,2‑丙二醇二酯，脂肪酸2‑氯‑1,3‑丙二醇单酯，脂肪酸2‑氯‑1,3‑丙二醇二酯进行定量。 |
