构建严谨型T7表达系统宿主菌的方法

摘要

本发明公开了一种构建严谨型T7表达系统宿主菌的方法。利用内含肽反式剪接构建严谨型T7表达系统宿主菌，将T7RNA聚合酶分解为氨基末端即N端聚合酶与羧基末端即C端聚合酶，选择一个内含肽I，将内含肽I也分解为氨基末端即N端与羧基末端即C端的内含肽I；将这两个氨基末端的聚合酶与内含肽I融合，在这个基因上游融合常用启动子及其控制基因；同样的，将这两个羧基末端的聚合酶与内含肽I融合融合，在这个基因上游融合一个常用启动子及其控制基因；将这两个融合部分插入大肠杆菌的染色体或低拷贝数质粒中，就得到了严谨型T7表达系统宿主菌。

主权项

构建严谨型T7表达系统宿主菌的方法，利用内含肽反式剪接，构建严谨型T7表达系统宿主菌，其特征是将T7RNA聚合酶分解为氨基末端即N端聚合酶与羧基末端即C端聚合酶，选择一个内含肽I，将内含肽I也分解为氨基末端即N端与羧基末端即C端的内含肽I；将这两个氨基末端的聚合酶与内含肽I编码基因融合，得到T7RNAPn‑In的编码基因，在这个基因上游融合常用启动子及其控制基因；同样的，将这两个羧基末端的聚合酶与内含肽I编码基因融合，得到T7RNAPc‑Ic的编码基因，在这个基因上游融合另一个常用启动子及其控制基因；将这两个融合部分插入大肠杆菌的染色体或低拷贝数质粒中，就得到了严谨型T7表达系统宿主菌，所述内含肽I为蓝藻Synechocystissp.PCC6803的DnaE。