一种同时测定转Bt基因抗虫棉种子发芽率、抗虫性纯度的方法

摘要

本发明公开了一种同时测定转Bt基因抗虫棉种子发芽率、抗虫性纯度的方法，其特征在于包括如下步骤：①配制0.4%-0.6%硫酸卡那霉素水溶液；②湿沙准备；③播种；④培养。本发明在适宜抗生素选择压力下，利用转Bt基因植株带有的新霉素磷酸转移酶(nptⅡ)基因作标记所编码的产物可使卡那霉素等氨基糖苷类抗生素失活而能够正常生长，而非转Bt基因植株因不含有nptⅡ基因作标记而不能够正常生长的机制，在测定转Bt基因抗虫棉种子发芽率的同时可以检测抗虫性纯度。本发明操作简单易行，费用低，其检测准确度达到100%。

主权项

一种同时测定转Bt基因抗虫棉种子发芽率、抗虫性纯度的方法，其特征在于包括如下步骤：①配制0.4%‑0.6%硫酸卡那霉素水溶液；②湿沙准备：选择干净河沙与水按6‑8:1比例拌匀备用；③播种：将步骤②准备的湿沙均匀铺到直径50cm的塑料盆底部，厚度2‑4cm；在湿沙上均匀摆放待检测的棉花种子100粒，种子间距不小于1.5cm；然后再在种子上面覆上厚3‑4cm步骤②准备的湿沙，压实；塑料盆顶上盖一层塑料薄膜；④培养：将步骤③中播好种子的塑料盆摆放在安装日光灯的室内，光照时间12小时/天，室内温度20℃‑30℃；第3天揭掉塑料薄膜，在湿沙表面均匀喷洒300mL步骤①中制备的硫酸卡那霉素水溶液；第5天开始每隔2‑3天给湿沙喷水，防止湿沙表面变干；第7天统计发芽率，第13‑15天观察抗虫性；苗势壮、叶色深绿的为抗虫株；苗势弱、子叶有黄斑或子叶全部变黄的为非抗虫植株。