一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法。本发明的技术方案是在制备聚苯胺载体同时加入蛋白酶进行吸附的反应-吸附耦联固定化蛋白酶方法，本发明为以苯胺及苯胺衍生物为单体，加入引发剂和助剂，同时加入需固定化的游离蛋白酶，放置于恒温条件下反应，过滤洗涤得到以聚苯胺为载体的固定化蛋白酶。本发明克服了现有传统酶固定化方法存在的固定化过程复杂，酶与载体的生物相容性较差，其与载体之间的结合作用相对较弱，固定化酶的稳定性差，使用寿命低，其固定化反应通常较剧烈，容易造成酶的失活，活力降低等缺陷。本发明具有固定化过程简单，条件温和，效率高，固定化酶的蛋白吸附量高，酶活力好，使用寿命长。

主权项

一种反应‑吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：在固定化反应器中加入聚苯胺单体和蒸馏水使得溶液浓度为0.01～0.2mol/L，用酸调节溶液pH为1.0～7.0；充分搅拌至溶液充分混合均匀后，在‑10℃～45℃条件下恒温静置；再向固定化反应器中加入事先在‑10℃～45℃条件下恒温的引发剂和助剂，引发剂与单体的摩尔浓度比为1∶0.3～1∶5，助剂和单体的摩尔浓度比为1∶1～1∶10，同时加入游离蛋白酶，单体质量与蛋白酶质量比为1∶0.01～1∶0.1；然后搅拌使整个体系混合均匀，放置于‑10℃～45℃恒温条件下反应；反应结束后，分别用蒸馏水、无水乙醇过滤洗涤多次至滤液无色，然后将产物真空干燥或冷冻干燥，得到固定化酶。