一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法

摘要

本发明公开了一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法。本发明所述方法是通过DNA结合蛋白在低严谨杂交条件下能增强双链DNA结合的稳定性，在高严谨洗脱条件下能够稳定的以双链形式存在而不被洗脱的原理，用来检测DNA结合蛋白。本发明所述方法是一种检测DNA结合蛋白表达和活化水平的新方法，具有高灵敏度、低费用、不需要使用核酸酶和针对DNA结合蛋白的特异性抗体的优点，既解决了以往检测方法中需要核酸酶和特异性抗体的问题，又能保证检测灵敏度，还可以对尚未有特异性抗体的DNA结合蛋白进行检测。

主权项

一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于所述方法是根据当DNA结合蛋白存在时，在高严谨洗脱条件下能增强双链DNA结合的稳定性而不被洗脱的原理，设计两条核酸序列，一条核酸序列是固定探针，含有DNA结合蛋白特异结合的核酸序列，该序列末端依据微孔板表面的化学基团进行相应的化学修饰，以便连接固定到微孔板表面；另一条核酸序列是显色探针，是与固定探针不完全互补的核酸序列，其末端依据显色系统进行相应的修饰，以便检测分析；显色探针与含DNA结合蛋白的细胞全蛋白或核蛋白抽提物与微孔板共孵育时，在高严谨洗脱条件下能够形成稳定双链而不被洗脱下来，通过末端修饰标记进行显色时有颜色显示；若不含有DNA结合蛋白，显色探针在高严谨洗脱条件下将会被洗脱下来，显色时将无颜色显示。