一种微生物基因克隆的方法

摘要

本发明公开了一种微生物基因克隆方法，该方法包括：用目标性状有差异的菌株做亲本，杂交构建分离群体；对分离群体设置选择压进行自动筛选，获得筛选后群体；对两个亲本、筛选前和筛选后群体进行基因组高通量测序；通过初步直接组装并比对，获得亲本特异位点，将亲本特异位点与筛选前、筛选后的群体基因组按完全匹配的方式进行比对，寻找在亲本与筛选前存在、在筛选后消失的位点，该位点为控制目标性状的候选基因位点，通过与亲本基因组比对获得基因的全长序列，并利用PCR扩增克隆目标基因，按遗传互补实验验证所克隆目标基因的功能。本发明直接克隆基因本身，避免了大量的微生物小种分离与鉴定工作。本发明的方法工作量小，速度快，而且风险低。

主权项

一种微生物基因克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：用目标性状有差异的菌株做亲本，通过杂交构建分离群体；通过抗性植株、农药、温度、营养元素对分离群体设置选择压进行自动筛选，获得筛选后群体；对两个亲本、筛选前和筛选后群体进行基因组高通量测序；通过初步直接组装并比对，获得亲本间差异位点，并将亲本间差异位点与筛选前和筛选后的群体基因组按完全匹配的方式进行比对，寻找在亲本与筛选前存在、但在筛选后消失的位点，该位点为控制目标性状的候选基因位点；通过与亲本基因组比对获得基因的全长序列，并利用PCR扩增克隆目标基因，按遗传互补实验验证所克隆目标基因的功能。