利用细菌核酸指纹特征谱库进行鉴定和分类的用途

摘要

本发明公开了一种用于鉴定和分类细菌的核酸指纹图谱库及其制备方法，包括PCR扩增、SAP酶消化、转录和核酸酶切、纯化、质谱仪检测等步骤。基于该方法，建立常见细菌的核酸指纹图谱数据库。根据实验产生的质谱特征图谱库，可对待检细菌进行分类与鉴定，结果可广泛运用于细菌分类和鉴定、遗传进化分析、耐药筛选用途以及进出口检验等领域。

主权项

一种基于酶切的细菌核酸指纹图谱库的制备方法，其特征在于，它至少包括如下步骤：（1）PCR反应：使用针对细菌的PCR通用引物，分别扩增多个细菌的核酸模板，得到含扩增目标区域的PCR产物；（2）SAP酶消化：用碱性磷酸酶（SAP酶）处理步骤（1）得到的PCR产物；（3）转录和核酸酶切：使用特定的转录和内切酶，分别在一个反应体系中，对步骤（2）得到的各个细菌的消化产物进行转录和核酸酶切，获得一系列长度不一、丰度不一的核酸片段；（4）纯化：使用树脂处理步骤（3）得到的酶切产物；（5）质谱仪检测：将步骤（4）得到的纯化产物上点在含有基质的靶片上，上质谱仪进行检测，得到不同细菌的特征核酸指纹谱图； (6)将得到的各种细菌的核酸指纹特征图谱，通过计算机软件进行汇总和整理，得到所述的细菌核酸指纹特征图谱库。