一种基于IIs型限制性内切酶消除PCR扩增产物污染的方法

摘要

本发明属生物技术领域，公开一种基于IIs型限制性内切酶消除PCR扩增产物污染的方法。设计上游引物和/或下游引物时引入目标序列中不含有的IIs型限制性内切酶识别位点碱基序列；向PCR反应体系中加入IIs型限制性内切酶，进行入IIs型限制性内切酶酶切反应后直接进行PCR扩增，当PCR反应体系中存在扩增产物污染时，IIs型限制性内切酶能够识别扩增产物上的IIs型限制性内切酶识别位点碱基序列，并完全切割掉扩增产物上与引物互补的部分，使扩增产物无法作为下一轮扩增的模板，从而消除聚合酶链式反应扩增产物对PCR反应的污染。本发明方法可选择性消除污染，不影响正常扩增效率和特异性，扩增产物可以正常进行下游操作。

主权项

一种消除聚合酶链式反应扩增产物污染的方法，其特征在于设计上游引物和/或下游引物时引入目标序列中不含有的IIs型限制性内切酶识别位点碱基序列；向PCR反应体系中加入IIs型限制性内切酶，对PCR反应体系进行入IIs型限制性内切酶酶切反应后直接进行PCR扩增，当PCR反应体系中存在扩增产物污染时，IIs型限制性内切酶能够识别扩增产物上的IIs型限制性内切酶识别位点碱基序列，并完全切割掉扩增产物上与引物互补的部分，使扩增产物无法作为下一轮扩增的模板，从而消除聚合酶链式反应扩增产物对PCR反应的污染；由于目标序列中不含有IIs型限制性内切酶识别位点碱基序列，当PCR反应体系未被扩增产物污染时，IIs型限制性内切酶不会对目标序列进行切割。