基于生物条码的核酸纳米金生物传感器

摘要

本发明提供一种用于基于生物条码检测核酸的高灵敏度纳米金生物传感器。它主要通过靶核酸富集和生物条码转换实现靶核酸的信号并放大，然后通过检测条码信号而测定靶核酸浓度。它包括两个系统：一.固定了第一寡核苷酸探针的微孔板和两种寡核苷酸标记的纳米金的放大系统，最终释放出条码核酸。二.用于检测条码寡核苷酸的检测系统，包括从左到右依次固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸。本发明由于使用生物条码扩大了检测信号，使其具有很高灵敏度，而且制备简便、检测迅速，不需要专业的技术人员及昂贵的仪器设备，适合大批量快速筛查，适用于基层，对低浓度的靶核酸能起到很好的快速诊断作用。

主权项

一种基于生物条码的核酸纳米金生物传感器，其特征在于，其包括：用于富集、转换并放大靶核酸信号的核酸放大装置；用于测定靶核酸浓度的核酸检测装置；以及液体试剂；所述核酸放大装置包括：微孔板，其上固定有第一寡核苷酸探针；以及纳米金颗粒，其上偶联有第二寡核苷酸探针和条码寡核苷酸；其中，所述第一寡核苷酸探针与第二寡核苷酸探针分别与靶核酸的两端序列互补，以致通过第一寡核苷酸探针‑靶核酸‑第二寡核苷酸探针的核酸夹心方式将纳米金颗粒固定在所述微孔板上，再通过洗涤去除未与微孔板结合的纳米金颗粒，用二硫苏糖醇释放出偶联在纳米金颗粒上的条码寡核苷酸；所述核酸检测装置包括从左到右依次固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述玻璃纤维上涂有纳米金标记第三寡核苷酸探针，该第三寡核苷酸探针是由巯基修饰并与胶体金偶联形成的，该第三寡核苷酸探针包含与条码寡核苷酸一端互补的核苷酸序列；所述硝酸纤维素膜上固定有两种寡核苷酸探针，为第四寡核苷酸探针和第五寡核苷酸探针，这些寡核苷酸探针是用生物素标记并与链霉亲和素偶联形成的；其中，固定于靠近吸水纸一端的第四寡核苷酸探针形成质控线，第四寡核苷酸探针与第三寡核苷酸探针互补；固定于靠近玻璃纤维一端的寡核苷酸探针第五寡核苷酸探针形成检测线，该第五寡核苷酸探针与条码寡核苷酸的另一端互补；所述液体试剂包括：用于裂解样品释放核酸的裂解缓冲液，其成分为：100mM Tris‑HCl，pH 7.5、500mM LiCl、10mM EDTA、1％[w/v]十二烷基硫酸锂、5mM二硫苏糖醇、10U RNase抑制剂；用于洗去微孔中未结合纳米金的洗涤液，其成分为：0.15M NaCl、0.01M 磷酸缓冲液、0.1％SDS，pH 7.4；以及用于释放结合在纳米金上条码核酸的转换液，包括：0.1M DTT、0.15MNaCl、0.01M磷酸缓冲液、0.1％SDS，pH 7.4。