反刍动物乳腺上皮细胞的保存方法

摘要

本发明公开了一种反刍动物乳腺上皮细胞的保存方法，包括以下步骤：1)制备冷冻保护液，该冷冻保护液由以下体积百分比的组份组成：10％DMSO、40％胎牛血清和50％细胞悬液；2)将上述步骤1)所得的冷冻保护液逐步慢速降温，直至冷冻保护液被降温至-196℃；将上述-196℃的冷冻保护液采用液氮冷冻保存。采用本发明的方法能延长反刍动物乳腺上皮细胞的保存时间。

主权项

一种反刍动物乳腺上皮细胞的保存方法，其特征是包括以下步骤：1)、制备冷冻保护液：冷冻保护液由以下体积百分比的组份组成：10％DMSO、40％胎牛血清和50％细胞悬液；所述细胞悬液是由细胞与DMEM/F12基础培养基形成的混合物，细胞在细胞悬液中的密度为1×106/mL，所述细胞为反刍动物原代培养的乳腺上皮细胞、纯化后的乳腺上皮细胞或传代培养的乳腺上皮细胞；所述反刍动物为处于泌乳期的荷斯坦奶牛；2)、将上述步骤1)所得的冷冻保护液逐步慢速降温：a、4℃降至‑8℃，降温速率为1℃/min；‑8℃保持一分钟；b、‑8℃降至‑20℃，降温速率为0.5℃/min；c、‑20℃降至‑120℃，降温速率为0.3℃/min；d、将上述步骤所得的‑120℃的冷冻保护液直接利用液氮降温，直至冷冻保护液被降温至‑196℃；将上述‑196℃的冷冻保护液采用液氮冷冻保存。