利什曼原虫液体培养基及其制备方法

摘要

本发明涉及黑热病疫情监测和黑热病诊断的液体培养基技术领域，是一种利什曼原虫液体培养基及其制备方法;本发明通过利什曼原虫液体培养基培养疑似黑热病病人的骨髓和肿大的动物脾脏，培养并分离利什曼原虫，与传统3N培养基比较，培养和分离荒漠型黑热病利什曼原虫的分离率，由不到1%提高到10%以上；出结果快，培养观察出结果时间由15天缩短到5天；保存方便，有效期由30天延长到2年。为黑热病临床诊断、流行病调查和利什曼原虫抗药性研究提供依据。

主权项

一种利什曼原虫液体培养基，其特征在于该利什曼原虫液体培养基含有NaCl 8.5g、KCl 0.4g、NaHCO3 1.6g、KH2PO3 0.2g、CaCl2 0.2g、葡萄糖5.0g、L‑谷氨酰胺 0.1g、Hepes 4.5g、RPMI‑1640 10.4g、小牛血清200 ml、去离子水1700ml、青霉素100万单位、链霉素100万单位、兔溶血液100 ml；该利什曼原虫液体培养基按下述步骤得到：第一步，依次将上述所需要量的NaCl、KCl、NaHCO3、KH2PO3、CaCl2、葡萄糖和L‑谷氨酰胺溶解混匀于上述所需要量的去离子水中，用0.1Mol/L的NaOH溶液调节pH至7.2，加入上述所需要量的Hepes、RPMI‑1640和小牛血清混匀；第二步，将充气管插入到液体下部，用充气管充注CO2气体到液体中，直至液体颜色由淡红色变为亮黄色，此时CO2气体在液体中达到饱和；第三步，加入上述所需要量的兔溶血液、青霉素和链霉素充分混匀；第四步，将充分混匀后的液体放在除菌过滤器中用压力为0.4公斤/cm2的CO2气体压滤除菌后得到利什曼原虫液体培养基，然后将利什曼原虫液体培养基分装到灭菌塑料瓶或玻璃瓶中，密闭，‑20OC保存。