一种快速鉴定四种海参品种的多重PCR方法

摘要

一种快速鉴定四种海参品种的多重PCR方法，属于分子生物学领域。本发明以四种海参的线粒体CO I基因为靶DNA，通过序列比对，分别设计出针对四种海参的种特异性引物。提取海参CO I基因，进行多重PCR检测，根据PCR产物分子量大小即可判断海参种类。仿刺参、梅花参、加州拟刺参和冰岛参经过多重PCR后，其特征性电泳条带分子量大小依次为202bp、301bp、261bp和358bp。本发明鉴定方法操作简单、成本低、检验周期短、特异性和重复性好、灵敏度高，克服了传统海参形态学鉴定方法所具有的工作量大、耗时长、成本高等缺点，能够实现海参品种的快速准确鉴定。

主权项

一种快速鉴定四种海参品种的多重PCR方法，其特征在于先将干海参泡发；再对泡发的干海参进行DNA模板提取；然后对CO I基因的特异性片段进行多重PCR扩增；最后对多重PCR扩增产物进行电泳检测，得到212bp、301bp、261bp和358bp的目的条带，对应的海参分别是仿刺参、梅花参、加州拟刺参和冰岛参；其中进行多重PCR扩增使用的特异性引物分别为：仿刺参引物AjapEF：5′‑CTCCCTCCTTCATTCTTCTTCTTG‑3’；AjapER：5′‑TATCCC[T/C]GGAGTCCGCATTTTA‑3’；梅花参引物TnasEF：5′‑GGAACAGGATGAACCATCTACCA‑3′；TnasER：5′‑CAGGGTCGAAGAAGGTTGTTTTT‑3’；加州拟刺参引物PcalEF：5′‑TGAACAATCTACCCT CCCCTCTCG‑3’；PcalER：5′‑GTCCGTTAATAACATTGTTATTGCACCG‑3’；冰岛参引物CfroEF：5′‑AGTAGAAAAAGGGGCAGGAACC‑3’；CfroER：5′‑GCAGAATAGGTGTTGGAAGAGTATAGGA‑3’；多重PCR扩增的条件是：94℃预变性5min；后经过25个循环，每个循环包括：94℃50sec，60℃1min，72℃45sec；最后72℃延伸10min；4℃保存。