一种超高效液相色谱-串联四级杆质谱同时测定中药中100种农药残留的方法

摘要

本发明提供了一种超高效液相色谱-串联四级杆质谱同时测定中药中100种农药残留的方法。中药材粉末用超纯水浸泡，用含0.1％乙酸的乙腈匀浆法提取，N-丙级乙二胺和石墨化碳固相分散净化，用超高效液相色谱-串联质谱在分时段多反应监测模式下检测，外标曲线法定量。88％的农药在5-500ng/mL范围内线性关系好，相关系数在0.99以上，98％的农药相关系数在0.97以上；农药在低浓度为10μg/kg、中浓度为50μg/kg、高浓度为100μg/kg的回收率平均值在70％-130％，相对标准偏差小于0.15；检出限≤0.01mg/kg，完全满足常规检测要求。该方法通用性强、选择性好、灵敏度高、快速简便。

主权项

一种超高效液相色谱‑串联四级杆质谱同时测定中药中100种农药残留的方法，其特征在于步骤如下：[1]农药标准品储备液的制备：分别称取100种农药标准品各10mg置于10mL容量瓶中，选择乙腈、甲醇或丙酮分别溶解农药标准品并定容至刻度，使100种农药标准品储备液的浓度均为1000μg/mL，农药标准品储备液‑18℃保存；[2]农药混合标准品溶液的制备：将上述100种农药标准品储备液分别取出，然后混合到一起，用乙腈定容，按照表3中的每种农药标准品在农药混合标准品溶液中的浓度数值制备农药混合标准品溶液；[3]中药材前处理液的制备：①将待检测的中药材饮片粉碎，过9号筛，得到待检测的中药材样品粉末，置干燥器中储存；②取2.00g待检测的中药材样品粉末，加入10mL超纯水，混匀后放置1小时，加入10mL乙酸体积分数为0.1％的乙酸乙腈混合液用涡旋振荡器涡旋提取1min；③向上述提取物中加入4g无水硫酸镁与1g氯化钠的混合物，继续涡旋提取1min；④在4℃下，3500rpm离心10min；⑤放置至室温时取出7mL提取液，加入混合吸附剂净化，振荡1‑2min，3500rpm离心10min；⑥移取5mL上清液，用氮气吹干，用含甲酸体积分数为0.1％的甲醇和水混合溶液定容至1mL，甲醇和水质量比为3∶2，过0.2μm滤膜，得到中药材前处理液，待检测；所述的混合吸附剂的加入量及组成为：1.05g无水硫酸镁，210mg N‑丙级乙二胺(PSA)，70mg石墨化碳(GCB)；[4]基质混合标准品溶液的制备取检测的不含农药残留的中药材样品粉末5份，每份为2.00g，均用上述的步骤[3]的①至⑤进行处理；在所述的⑥，移取5mL上清液，分别加入步骤[2]制备的农药混合标准品溶液，使得到的溶液中的农药的最终浓度分别为5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg，均用氮气吹干，分别用甲酸体积分数为0.1％的甲醇和水混合溶液定容至1mL，甲醇和水体积比为3∶2，过0.2μm滤膜，得到5份待检测的基质混合标准溶液；[5]中药材前处理液的检测：将步骤[3]得到的中药材前处理液用自动进样器进样，进样体积5μL，利用超高效液相色谱对待测的100种农药进行分离后，在电喷雾(ESI)电离源正、负离子多反应监测模式下对中药材前处理液进行测定；[6]超高效液相色谱的检测条件如下：超高效液相色谱仪：ACQUITY UPLC(Waters，美国)；色谱柱：Acquity UPLC BEH C18色谱柱(1.7μm，2.1×100mm)(Waters，美国)；流动相A为乙腈，B为甲酸的体积分数为0.1％的水溶液；流速：0.3毫升每分钟；柱温：35℃；梯度：0分钟‑1分钟A为5％‑10％，1‑4分钟A为10％‑30％，4‑8分钟A为30％‑60％，8‑13分钟A为60％‑90％，13‑14分钟A为90％‑70％，14‑15分钟A为70％‑5％；[7]质谱检测条件如下：质谱仪：Waters Xevo TQ；电喷雾离子源，正、负离子同时扫描，多反应监测模式，毛细管电压3.20kV，离子源温度150℃，脱溶剂气为氮气，温度为500℃，干燥气流速800L/Hr，碰撞气为氩气，氩气流速为0.16mL/min；[8]标准曲线与基质校准曲线：吸取上述步骤[2]的农药混合标准品溶液，制成浓度分别为0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的农药混合标准品溶液，分别进样5μL，用超高 效液相色谱‑串联质谱进行分析，记录各待测组分MRM色谱峰面积，以各成份的浓度为横坐标X，各成份的峰面积为纵坐标Y，进行回归分析，可得到100种农药的线性回归方程，每个线性回归方程都可以做出一条曲线，即标准曲线；由此标准曲线判断100种农药的线性范围，农药的标准曲线均由仪器软件自动给出；所述的线性范围指的是标准曲线为直线的农药的浓度范围；为消除中药材前处理液中化学成分对测定的影响，用基质校准曲线代替标准曲线进行定量分析；取上述步骤[4]的基质混合标准溶液，分别进样5μL，用超高效液相色谱‑串联质谱进行分析，记录各待测组分MRM色谱峰面积，以各成份的浓度为横坐标X，各成份的峰面积为纵坐标Y，进行回归分析，得到100种农药的线性回归方程；此线性回归方程对应的曲线为基质校准曲线，此曲线可用于定量分析[9]灵敏度实验灵敏度实验包括仪器的灵敏度和方法的灵敏度，仪器的灵敏度用仪器的检出限表示，方法的灵敏度用方法的定量限表示；将步骤[2]制备的农药混合标准品溶液用体积分数为60％甲醇的水溶液逐级稀释，并分别进样分析，测定信噪比，取信噪比≥3的农药混合标准品溶液的最小浓度作为仪器检测限；将步骤[2]制备的农药混合标准品溶液用中药材前处理液逐级稀释，并进样分析，测定信噪比，取信噪比≥10的农药混合标准品溶液的最小浓度作为方法定量限；[10]准确性及重复性实验取不含农药残留的中药材粉末9份，每份为2.00g，每3份分别加入浓度为1μg/mL的步骤[2]制备的农药混合标准品溶液200μL、100μL、20μL；按照上述步骤[3]制备中药材前处理液，并进样分析，计算回收率及相对标准偏差；所述的准确性用回收率来表示，重复性用相对标准偏差来表示。