发明名称 |
共表达两种亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒的制备 |
摘要 |
本发明涉及一种共表达两种亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒的制备,其特征在于:首先分别设计针对H1N1和H3N2亚型SIVHA及FMD2A引物序列,然后将其与酶切后的腺病毒穿梭载体pAdTrack连接,进行同源重组,经PCR和酶切鉴定得重组腺病毒质粒;将得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293T细胞,包装后将得到的病毒原液感染293T细胞或MDCK细胞。该重组腺病毒为H3、H1亚型猪流感病毒双价核酸疫苗的研制提供病毒模型,也为进一步研究开发基因工程疫苗奠定了基础。2009年3月至今,流行于全球许多国家人群中的H1N1亚型流感进一步突出了SI在人类公共卫生方面具有的潜在危害性,研制高效、安全的疫苗为SI的防制提供物质储备。 |
申请公布号 |
CN102719479A |
申请公布日期 |
2012.10.10 |
申请号 |
CN201210069489.9 |
申请日期 |
2012.03.16 |
申请人 |
吉林大学 |
发明人 |
丁壮;樊娇;丛彦龙;李鑫;杨建新;韩明明;郭育培;刘慧;朱利塞;黄志强 |
分类号 |
C12N15/861(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/861(2006.01)I |
代理机构 |
吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 |
代理人 |
王薇 |
主权项 |
共表达两种亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒的制备,其特征在于:首先分别设计针对H1N1和H3N2亚型SIV HA及FMD 2A引物序列,然后将其与酶切后的腺病毒穿梭载体pAdTrack连接,经PCR和测序鉴定;将鉴定正确的重组腺病毒穿梭载体转化入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy‑1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,进行同源重组,经PCR和酶切鉴定得重组腺病毒质粒;将得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293T细胞,进行重组腺病毒的包装;包装后将得到的病毒原液感染293T细胞或MDCK细胞,48h后观察荧光蛋白表达情况,并通过PCR方法鉴定,具体步骤如下:1) 根据GeneBank上H1N1和H3N2亚型SIV HA及FMD 2A序列设计引物;2)HA序列与pAdTrack载体连接,转化,挑去菌落,应用OMEGA质粒提取试剂盒提取质粒,通过PCR,酶切及测序鉴定结果显示该重组腺病毒穿梭质粒构建成功;3)重组腺病毒穿梭质粒与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183感受态中同源重组,得到重组腺病毒质粒后转染293T细胞进行包装;4)将转然后得到的病毒原液感染293T细胞,48h后观察荧光蛋白表达情况,并提取细胞基因组DNA,通过PCR方法检测HA基因序列;5) 用重组病毒免疫 6 周龄的雌性昆明鼠,在二免后两周用H1N1和H3N2 SIV进行攻毒,测攻毒后免疫保护率以评价该重组病毒对小鼠的免疫保护效果。 |
地址 |
130062 吉林省长春市西安大路5333号 |