| 主权项 |
一种对虾抗病毒能力测试的定量、大规模感染方法，其特征在于具体包括以下步骤：1)、感染前的准备选取体质健康、规格整齐，体长2.0‑2.5cm的各家系对虾为测试个体，每个对虾都具有标示，水温为正常养殖期水温，按常规操作正常投喂、换水；2)、感染源制备病源为‑80℃保存的自然感染待测病毒发病的对虾；取病虾的鳃，剪碎后按约1g鳃组织：15mL溶液的比例，加入缓冲液，缓冲液的成份为：20mmol/L Tris‑HCl，0.4mol/L NaCl，10mmol/L EDT A，pH7.5，用匀浆机搅打，制备成匀浆液，用双层纱布挤压过滤去粗渣，再在4℃，8000r/min离心15min去沉淀，上清液再在4℃，15000r/min离心40min，弃去上清液，沉淀加8倍体积的上述缓冲液溶解，即得待测病毒悬液，用无菌生理盐水以1∶200体积稀释待测病毒悬液，注射感染经PCR检验后的健康对虾，每尾对虾注射200L，确认已感染待测病毒后，取对虾的鳃和肌肉，用匀浆机搅匀打碎，制成适合感染对虾口径的均匀颗粒；3)、逐尾感染将待测试对虾分别置于透明塑料容器中，塑料容器底部铺设黑色背景以便于观察，饥饿2小时后，将毒饵投入容器中，观察对虾摄食情况；4)、数据采集及分析感染结束后，实验用对虾全部转入同一大型混养池中，正常投饵、换水，观察对虾死亡情况，从第一尾对虾死亡开始记录对虾死亡时间、体长、体重及家系编号；死亡高峰时，每个小时吸池底一次，并收集死虾置‑80℃保存，实验废水施用50ppm有效氯消毒处理后排放，严格操作，以免病毒扩散，实验结束后，选择存活率较高的家系的备份留种，感染实验中长期存活的对虾同时作为抗病良种转移到新池中培育。 |
