一种以叶原基为外植体的金钱松愈伤组织培养方法

摘要

本发明公开了一种以叶原基为外植体的金钱松愈伤组织培养方法，该方法是先将金钱松的芽进行消毒处理，再切取消毒后的芽上的叶原基作为外植体接入愈伤组织诱导培养基MS+6-BA 1.0～2.0mg·L-1+NAA 0.1～1.0mg·L-1+IAA 0.1～0.5mg·L-1+蔗糖20～50g·L-1+琼脂5.0～7.0g·L-1和增殖培养基MS+6-BA 0.5～1.0mg·L-1+NAA 0.1～1.0mg·L-1+蔗糖20～50g·L-1+琼脂5.0～7.0g·L-1或MS+6-BA 0.5～1.0mg·L-1+IAA 0.1～1.0mg·L-1+蔗糖20～50g·L-1+琼脂5.0～7.0g·L-1中进行培养，最终实现了对金钱松植物愈伤组织的有效诱导和快速增殖。本发明有效地解决了当前金钱松药材资源短缺的问题。

主权项

一种以叶原基为外植体的金钱松愈伤组织培养方法，其特征在于包括如下步骤：(1)材料的选取和消毒：选取落叶后生长健康、无病虫害的金钱松植株上的芽，剥去芽上的芽鳞片后将芽放在超净工作台上，先用浓度为70％的酒精消毒10～50s，再用浓度为0.1％～0.15％的升汞消毒3～25min，最后用无菌水冲洗2～5次后用已灭菌的滤纸吸干水分；(2)愈伤组织的诱导培养：取已消毒的芽，切取芽上的叶原基作为外植体接入愈伤组织诱导培养基MS+6‑BA 1.0～2.0mg·L‑1+NAA 0.1～1.0mg·L‑1+IAA 0.1～0.5mg·L‑1+蔗糖20～50g·L‑1+琼脂5.0～7.0g·L‑1中进行培养，pH值为5.6～6.5，培养温度5～30℃、每天光照0～24小时、光照强度为1000～2000lx；(3)愈伤组织的增殖培养：选取无褐变、颜色为翠绿色、质地较紧密的愈伤组织，将其切成大小为3～8mm3的团块后转接入愈伤组织增殖培养基MS+6‑BA 0.5～1.0mg·L‑1+NAA 0.1～1.0mg·L‑1+蔗糖20～50g·L‑1+琼脂5.0～7.0g·L‑1或MS+6‑BA 0.5～1.0mg·L‑1+IAA 0.1～1.0mg·L‑1+蔗糖20～50g·L‑1+琼脂5.0～7.0g·L‑1中进行培养，pH值为5.6～6.5，培养温度5～30℃、每天光照0～24小时、光照强度为1000～2000lx。