一种在毕赤酵母中有效的表达阳离子抗菌肽的方法

摘要

本发明涉及基团工程领域，具体地，本发明涉及一种在毕赤酵母中有效的表达阳离子抗菌肽的方法。本发明的方法可以通过酸性酶带动阳离子抗菌肽的表达；酸性酶的大量酸性氨基酸可以中和阳离子抗菌肽的碱性氨基酸，使其免受宿主蛋白酶的攻击；可以直接通过表达的重组酶的活力的大小来判断抗菌肽产量的高低；同时表达产物和抗菌肽可以同时直接被应用。

主权项

一种在毕赤酵母中有效的表达阳离子抗菌肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)改造阳离子抗菌肽或其前体序列，在其两端添加毕赤酵母自身蛋白酶的酶切位点，并合成改造后的序列，所述阳离子抗菌肽为鲎素Tachyplesin I；2)将上述合成序列插入毕赤酵母表达载体中，得毕赤酵母表达载体‑阳离子抗菌肽序列的重组表达载体；3)将在毕赤酵母中表达的、表面带高负电荷的酸性酶插入到上述重组载体中所述阳离子抗菌肽序列之后，得毕赤酵母表达载体‑阳离子抗菌肽‑酶的重组表达载体，所述表面带高负电荷的酶为基因序列如SEQ ID No.1所示的酸性木聚糖酶；4)将上述毕赤酵母表达载体‑阳离子抗菌肽‑酶重组表达载体在毕赤酵母中表达。