一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法

摘要

本发明公开了一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法，该重组菌株由以下步骤构建得到：(1)通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin-like protease基因连接，再将融合PCR扩增产物转化入枯草芽孢杆菌WB800，得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S；(2)PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因，然后将扩增产物转化入枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S中得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG。将枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800S/proMTG发酵、纯化，得到可溶性的转谷氨酰胺酶。本发明方法可以在发酵液上清中直接获得具有生物活性的转谷氨酰胺酶，省去了繁琐的细胞破碎、纯化后激活酶原等过程，简化了发酵生产工艺。

主权项

一株重组的枯草芽孢杆菌，其特征在于是由以下步骤构建得到：(1)构建枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S：PCR扩增白浅灰链霉菌蛋白酶subtilisin‑like protease基因；PCR扩增P43启动子+samyQ信号肽基因；然后通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin‑like protease基因连接，再将融合PCR扩增产物连接入PKS2质粒基因，最后将重组的PKS2质粒转化入枯草芽孢杆菌WB800，得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S；(2)构建枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG：PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因，然后将扩增产物连接入表达载体pBEP43中，得到融合表达质粒pBEP43‑proMTG；将质粒pBEP43‑proMTG转化入步骤(1)的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S中得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG；所述的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG已于2011年12月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2011492。