无网格BAC文库的建立方法及该无网格BAC文库阳性克隆的筛选方法

摘要

无网格BAC文库的建立方法及该无网格BAC文库阳性克隆的筛选方法，它涉及一种简便基因文库的建立与筛选。它解决现有无网格BAC文库阳性克隆技术中DNA杂交技术程序复杂，花费时长，存在假阳性，而且难以获得单个阳性克隆的问题。文库建立：一、BAC克隆载体的制备；二、大片段DNA的制备；三、连接及转化。阳性克隆筛选：一、PCR取阳性pool进行梯度稀释；二、振荡培养；三、用菌体离心PCR，选取滴度最大的菌液进行涂板，然后挑取8～15个克隆振荡培养，进行PCR反应，将阳性克隆pool进行再次涂板，选取单个克隆进行验证，即可获得单个阳性克隆。本发明用于BAC文库的建立和阳性克隆的筛选。

主权项

无网格BAC文库的建立方法，其特征在于无网格BAC文库按以下步骤建立：一、BAC克隆载体的制备；二、大片段DNA的制备；三、连接及转化，然后选择含BAC克隆1000～3000个的培养皿，用LB液体培养基或SOB液体培养基进行洗脱，均制成BAC克隆的悬浮液，混合均匀后都等分为2管，一组管为DNA提取筛选管，另一组管为无网格BAC文库管，即实现无网格BAC文库的建立。