一种D-塔格糖3-差向异构酶固定化方法

摘要

一种D-塔格糖3-差向异构酶固定化方法，属生物工程技术领域。本发明步骤是：（1）预处理菌体获得目的酶液；（2）预处理离子交换树脂；（3）向处理好的大孔离子交换树脂中加入D-塔格糖3-差向异构酶液进行吸附后，加入戊二醛溶液进行交联，用去离子水洗涤以除去游离酶和未交联的戊二醛，即得到固定化的D-塔格糖3-差向异构酶。本发明以离子交换树脂为载体，通过先吸附后交联的方法固定了D-塔格糖3-差向异构酶，该法操作简单，成本低廉，固定的D-塔格糖3-差向异构酶储存稳定性和操作稳定性高，有较宽的pH适应性，固定化酶活回收率可达50%以上。

主权项

一种D‑塔格糖3‑差向异构酶固定化方法，其特征在于包括下列步骤：（1）获取酶液：称取R．sphaeroides SK01l发酵菌体，按质量体积比1:10的比例，加入50mmol/L Tris‑HCl、50mmol/L NaCl、pH7.0‑8.0缓冲液重悬菌体，利用超声波细胞破碎仪处理菌体后，在转速为6000~10000r/min、温度为0~5℃的条件下离心10~30min，收集上清液，此上清液即为D‑塔格糖3‑差向异构酶液；（2）离子交换树脂处理：采用313、或D301‑Ⅲ离子交换树脂，先用去离子水浸泡胀润、去杂，接着用质量浓度4%NaOH溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性，再用质量浓度4%HCl溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性，最后用质量浓度4%NaOH溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性，用两倍树脂体积的去离子水浸泡，4℃下保存；（3）固定化：采用先吸附后交联的方法，向处理好的离子交换树脂中加入D‑塔格糖3‑差向异构酶液，每g树脂加入D‑塔格糖3‑差向异构酶粗酶液1‑6mL，并加入上述Tris‑HCl缓冲液补足6mL，于pH 7.0~8.0、20~40℃吸附6~12h后取出；加入戊二醛溶液至终浓度为0.01%~0.2%，于2~8℃轻轻振荡交联1~5h，用去离子水洗涤以除去游离酶和未交联的戊二醛，即得到固定化的D‑塔格糖3‑差向异构酶。