去乙酰真菌环氧乙酯的制备方法

摘要

去乙酰真菌环氧乙酯的制备方法，涉及一种菌株代谢产物。提供一种去乙酰真菌环氧乙酯的制备方法。菌株A-1-2-3为一株拟茎点霉(PHomopsis sp.)。去乙酰菌株环氧乙酯的分子式为C14H16O4。发酵提取物预处理，得粗提物浸膏；将粗提物浸膏为上样样品进行反相硅胶柱层析，取粗提物浸膏用甲醇溶解，湿法上样，以甲醇-水溶液为流动相，进行洗脱，分管收集洗脱液；合并洗脱液中含有去乙酰菌株环氧乙酯的组分，减压浓缩至干，进行结晶试验，采用静态溶析结晶方法和动态溶析结晶方法对去乙酰菌株环氧乙酯进行结晶；通过过滤将晶体与结晶残液分离，用蒸馏水洗涤晶体，晶体用丙酮溶解进行重结晶，得纯化的去乙酰菌株环氧乙酯。

主权项

1.去乙酰真菌环氧乙酯的制备方法，其特征在于所述去乙酰真菌环氧乙酯是菌株A-1-2-3代谢产生的化合物，所述菌株A-1-2-3是一株拟茎点霉(Phomopsis sp.)，所述去乙酰真菌环氧乙酯的分子式为C₁₄H₁₆0₄，结构式为：其中，1～14为14个碳原子，所述化合物含有1个酯羰基，12个次甲基，1个甲基；其中12个次甲基包括6个不饱和次甲基，6个饱和次甲基；所述化合物分子量为248，其化学名为2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃酮，为一白色羽状或棒状透明晶体，易溶于甲醇；其体外有较好的抗肿瘤活性，对Raji细胞的半数抑制浓度IC₅₀为3.0μg/mL；所述去乙酰真菌环氧乙酯的制备方法包括以下步骤：1)发酵提取物的预处理：菌株A-1-2-3发酵产物加入1～2倍的乙酸乙酯提取，收集提取液，在40～45℃减压浓缩至膏状，将膏状粗提物用甲醇溶解，过滤，再次减压浓缩，得粗提物浸膏，所述菌株A-1-2-3发酵产物是菌株A-1-2-3在含20％海水的PDA培养基上发酵14天得到的，发酵温度为28℃；2)反相硅胶柱层析分离：将步骤1)中得到的粗提物浸膏为上样样品，进行反相硅胶柱层析，首先用丙酮充分洗出残留在硅胶中的杂质，再用含甲醇为0～15％的水溶液平衡，流速为20～25ml/min，所述反相硅胶采用德国Merck公司生产的Silica gel 60RP-18反相硅胶，所述用丙酮充分洗出残留在硅胶中的杂质的洗脱流速为20～25ml/min，洗脱的时间为30～40min；取粗提物浸膏用甲醇溶解，湿法上样，以甲醇-水溶液为流动相，进行洗脱，分管收集洗脱液，所述甲醇-水的体积比为(25∶75)～(35∶65)，所述洗脱的流速为15～30ml/min；3)合并洗脱液中含有去乙酰真菌环氧乙酯的组分，减压浓缩至干，进行结晶试验，采用静态溶析结晶方法和动态溶析结晶方法对去乙酰真菌环氧乙酯进行结晶；4)通过过滤将晶体与结晶残液分离，用蒸馏水洗涤晶体，晶体用丙酮溶解进行重结晶，得纯化的去乙酰真菌环氧乙酯。