传染性羊痒病抗性基因快速分型检测试剂及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种传染性羊痒病抗性基因快速分型检测试剂及其制备方法和应用，设计合成了三套特异性的引物及Taqman探针，分别针对决定羊痒病抗性/敏感性的羊朊蛋白编码基因PRNP的第136、154和171位密码子进行检测，用来判定被检羊是否含有传染性羊痒病抗性基因。本发明借助实时荧光定量PCR检测体系及其之后的终点读板模式，建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的基因分型方法，检测时间仅为数小时。借助该方法可建立一整套完善的预警监测体系来预防羊痒病的发生，可用于常规实验室诊断方法，并作为出入境检验检疫部门对活羊引入的检测项目，以杜绝羊痒病敏感型品种传入。

主权项

一种传染性羊痒病抗性基因快速分型检测试剂，其特征在于，包含三对特异性引物和七条特异性探针，分别针对羊朊蛋白编码基因PRNP的第136、154和171位密码子进行诊断，扩增目标长度分别为136bp、106bp和97bp，引物和探针序列为：136位密码子检测用上游引物：136‑1：5’‑CTGCAGCTGGAGCAGTGGTA‑3’下游引物：136‑2：5’‑ACTTGGTTGGGGTAACGGTAC‑3’A型检测探针：136‑A：5’‑FAM‑TCATGGCACTTCC‑MGB‑3’V型检测探针：136‑A：5’‑VIC‑CTCATGACACTTCC‑MGB‑3’154位密码子检测用上游引物：154‑1：5’‑GGCAATGACTATGAGGACCG‑3’下游引物：154‑2：5’‑GCACAAAGTTGTTCTGGTTAC‑3’R型检测探针：154‑R：5’‑FAM‑ACTATCGTGAAAACAT‑MGB‑3’H型检测探针：154‑H：5’‑VIC‑TACTATCATGAAAACATG‑MGB‑3’171位密码子检测用上游引物：171‑1：5’‑CCCAACCAAGTGTACTAC‑3’下游引物：171‑2：5’‑TGACTGTGTGTTGCTTGACTG‑3’R型检测探针：171‑R：5’‑FAM‑CCAGTGGATCGGTATA‑MGB‑3’H型检测探针：171‑H：5’‑VIC‑ACCAGTGGATCATTAT‑MGB‑3’Q型检测探针：171‑Q：5’‑VIC‑ACCAGTGGATCAGTATA‑MGB‑3’。