一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法

摘要

本发明涉及一种β-伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法。本发明方法首先采用化学法或基因工程技术制备含β-伴大豆球蛋白α亚基IgE抗原表位的表位小肽，然后将表位小肽耦联到载体蛋白或载体多肽上免疫动物，取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经克隆、筛选获得分泌β-伴大豆球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，采用细胞培养和腹水法制备β-伴大豆球蛋白单克隆抗体。本发明制备的单克隆抗体，针对β-伴大豆球蛋白中的过敏表位，特异性强，明显优于现有技术制备的抗体，在大豆品种选育与改良、β-伴大豆球蛋白分离纯化与检测、β-伴大豆球蛋白致敏机理研究等领域具有广泛用途。

主权项

一种β‑伴大豆球蛋白单克隆抗体制备方法,其特征在于该方法具体步骤是：步骤(1).制备抗原：采用化学法或基因工程技术制备含β‑伴大豆球蛋白α亚基IgE抗原表位的表位小肽，然后将此表位小肽耦联到载体蛋白或载体多肽上，制备免疫用抗原；步骤(2).免疫动物：将耦联载体的表位小肽与弗氏佐剂混合免疫动物，第一次用完全弗氏佐剂，以后用不完全弗氏佐剂，每两周免疫一次，并于融合前2～4天等量抗原加强免疫；步骤(3).细胞融合、筛选及克隆化：选取抗血清效价最高的动物取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合，经三次亚克隆获得稳定分泌抗β‑伴大豆球蛋白单克隆抗体的细胞株；步骤(4).细胞培养：将上述细胞株体外扩大培养后，收集上清液；步骤(5).腹水制备：将扩大培养后的杂交瘤细胞株注入动物腹腔，以大量生产腹水，提取、纯化后即可得到β‑伴大豆球蛋白单克隆抗体。