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黑麦冬的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)无菌材料的获得春季取萌发的幼嫩的芽，去除外面包裹的叶片后，用自来水冲洗1‑3h后于超净工作台上，依次利用质量浓度为70‑75％的乙醇浸泡10‑50s，体积浓度为0.5‰的汞浸泡10‑30min，再用无菌水冲洗4‑6次，利用无菌滤纸吸干芽表面的水分后，将芽切成0.5‑2cm长的带腋芽的节段，节段接种于芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖节段接种于芽诱导培养基上2‑4周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，4‑6周后见芽分生组织，再培养1‑3个月，小芽长到1‑2cm，将小芽切下转入芽的增殖培养基中进行增殖培养，小芽基部的愈伤组织较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速且无玻璃化的不良现象，在培养基中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在芽的增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有2‑3株能够伸长，其余的处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至壮苗培养基上生长，不定芽迅速伸长，30‑45天后长至3‑4cm；(4)生根培养取3‑4cm的不定芽小植株，转接入生根培养基中诱导生根，25‑40天后幼苗基部分化出白色的根原基，40‑60天后长至2‑4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90‑100％；(5)炼苗与移栽生根培养40‑60天，根系长至2‑4cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1‑4天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化20‑40天，即移栽室外，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90‑100％；所述的芽诱导培养基包括MS+6‑BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L；所述的芽的增殖培养基包括MS+6‑BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；所述的壮苗培养基包括MS+6‑BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；所述的生根培养基包括MS+NAA0.3mg/L。 |
