生产一种白细胞介素类似物的方法

摘要

一种利用大肠杆菌表达并应用疏水层析纯化和生产一种在氨基酸序列上与人白细胞介素2类似的蛋白的方法，纯化后的蛋白比活性不低于1×108国际单位/毫克蛋白。

主权项

一种利用大肠杆菌表达并应用疏水层析纯化和生产一种人白细胞介素2类似物的方法，包括下列步骤：1)化学合成编码人白细胞介素2类似物的核苷酸，2)对含有编码人白细胞介素2类似物核苷酸序列的大肠杆菌进行发酵，3)提取包涵体，4)应用疏水层析柱进行复性和纯化，其特征在于，所述人白细胞介素2类似物的氨基酸序列为：      Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln LeuGlu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile AsnAsn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys PheTyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys LeuGlu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala GlnSer Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn IleAsn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe MetCys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu AsnArg Trp Ile Thr Phe Ser Gln SerIle Ile Ser Thr Leu Thr；所述人白细胞介素2类似物在大肠杆菌中表达；步骤4)中包涵体的复性在Butyl Sepharose4Fast Flow疏水层析柱上完成并同时实现包涵体纯化，复性中用5‑20倍柱体积的线性梯度由8mol/L尿素‑0.001mol/L DTT过渡到2mol/L尿素‑0.005mol/L谷胱苷肽，最后用pH7.5的0.1mol/L PBS‑2mol/L尿素洗脱蛋白，然后通过测定280nm的吸光度来自动监测各物质的洗脱，收集富含活性形式的白细胞介素2类似物的来自前面步骤的组分装入离子交换层析柱上，用0.1‑0.3mol/L NaCl通过SP‑Sepharose离子交换层析洗脱蛋白，收集富含活性形式的白细胞介素2类似物的来自前面步骤的组分装入凝胶排阻层析柱上，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液通过Sephacyl S‑200凝胶排阻层析洗脱蛋白，纯化后的蛋白比活性不低于1×108国际单位/毫克蛋白。