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基于喷墨打印原理测定抗生素最低抑菌浓度的方法，其特征在于包括以下步骤：1) 喷墨打印机的改造：拆除打印机主体的基座、卷纸装置及废墨清除装置；拆除墨盒的外盖、墨盒内的吸墨海绵以及墨盒底部的过滤网，彻底清洗干净后用紫外灯灭菌；2) 编辑用于控制抗生素打印的梯度渐变灰阶条带：利用PowerPoint软件编辑一个宽A、长B的矩形梯度渐变灰阶条带，该条带的一端为灰阶值255的纯白，另一端为灰阶值0的纯黑，中间部分呈从白到黑的渐变状态，其灰阶值为从255递减到0的整数，整个矩形梯度渐变灰阶条带共256级灰阶级数；3) 实验菌悬液的制备：配制Mueller‑Hinton肉汤：牛肉浸出粉0.2%，可溶性淀粉0.15%，酸水解酪蛋白1.75%，pH7.4±0.2，121℃灭菌15min；用接种环挑取实验菌菌落3‑5个，接种于5ml配制好的Mueller‑Hinton肉汤中，35℃孵育8‑12h后用生理盐水将其浓度稀释至1~2×108CFU/ml；4) 含菌琼脂玻璃双碟的准备：配制Mueller‑Hinton琼脂培养基：牛肉浸出粉0.6%，可溶性淀粉0.15%，酸水解酪蛋白1.75%，琼脂1.7%，pH7.3±0.2，121℃灭菌15min；将内径为90mm的玻璃双碟放置在水平台上，注入15‑20ml灭菌后的Mueller‑Hinton琼脂培养基，使其冷却凝固；用无菌棉签蘸取步骤3) 制备的实验菌悬液，在凝固的琼脂培养基表面均匀涂布接种3次，室温下干燥15min，备用；5) 待测抗生素样品的准备与打印：用磷酸盐缓冲液充分溶解待测抗生素样品粉末，控制待测抗生素样品的浓度在103‑105μg/ml之间，取出100 µl配置好的待测抗生素样品滴加到黑色墨盒，作为打印用的“墨”；将步骤4）的含有实验菌的琼脂玻璃双碟放置在墨盒喷头下方1mm处，作为抗生素打印用的 “纸”， 打印出按照步骤2）所编辑的梯度渐变灰阶条带；6) 抗生素MIC值的计算：将打印了待测抗生素样品的含有实验菌的琼脂玻璃双碟放置在37℃恒温培养箱培养18‑24h，形成一个边缘平滑的椭圆形抑菌圈；由公式 (1) 计算抗生素MIC值：MIC = (S/N) *(l/L) * C *R*V ‑‑‑‑‑‑ (1)式中S 为所编辑矩形梯度渐变灰阶条带的面积，单位为mm2；N为矩形梯度渐变灰阶条带的灰阶级数；l表示灰阶条纯白端到灰阶条与椭圆抑菌圈边缘相交处的直线距离，单位为mm；L为所编辑的灰阶条的长度，单位为mm；C为滴加到墨盒中待测抗生素样品的初始浓度，单位为μg/ml；R为所使用的打印机的分辨率，单位为d.p.mm；V为打印机最小喷墨液滴的体积，单位为ml。 |
