适用于生产稳定性同位素¹⁵N标记L-亮氨酸的发酵生产工艺

摘要

本发明涉及适用于生产稳定性同位素15N标记L-亮氨酸的发酵生产工艺，该工艺包括以下步骤：(1)出发菌株的选取；(2)发酵培养配方；(3)发酵工艺；(4)分离提取。与现有技术相比，本发明获得的15N稳定性同位素标记L-亮氨酸产酸量高，15N稳定性同位素标记L-亮氨酸15N丰度下降少，有的甚至不下降，简化了发酵和提取工艺，大大节省了原料，降低了成本。

主权项

适用于生产稳定性同位素15N标记L‑亮氨酸的发酵生产工艺，其特征在于，该工艺包括以下步骤：取黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)ATCC39106一环菌体接入斜面活化培养基，放入生化培养箱，30℃下培养28小时，在无菌操作台上将斜面活化培养基上的菌体接入事先配好的发酵培养基中，每瓶接一环菌体，接种完用九层纱布封口，置于旋转式摇床上，在30℃、160rpm下发酵42小时后将摇床转速提高至220rpm再发酵42小时，将上述发酵液离心分离10分钟，离心转速为4000rpm，所得到的上清液用盐酸调节pH＝2，上H+型阳离子交换树脂吸附，水洗后用0.1mol/l氨水洗脱，将得到的L‑亮氨酸‑15N单斑洗脱液浓缩，活性炭脱色，再结晶并过滤得到的晶体真空干燥得到L‑亮氨酸‑15N固体；所述的斜面活化培养基配方如下：葡萄糖：3g/l，蛋白胨：10g/l，牛肉膏：10g/l，氯化钠：5g/l，琼脂：20g/l；所述的发酵培养基配方如下：葡萄糖：100g/l，(15NH4)2SO4：20g/l，其中15N原子丰度为10.24％，MgSO4·7H2O：6mg/L，MnSO4·H2O：4mg/L，FeSO4·7H2O：4mg/L，KH2PO4：1g/l，VH：600ug/L，VB1：400ug/L，泛酸：100ug/l，尼克酸：100ug/l，玉米桨：2g/l；所述的斜面活化培养基及发酵培养基均用2mol/l氢氧化钠调节pH＝7.0，在115℃高压灭菌锅中灭菌15分钟，用500ml三角瓶以20ml的载液量分装。