水稻基腐病致病细菌毒素的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种水稻基腐病致病细菌毒素的制备方法，水稻基腐细菌致病菌株经无机盐培养液培养后离心取上清液，经AB-8吸附树脂柱、聚酰胺柱层析、制备薄层层析、葡聚糖凝胶获得毒素纯品T3。本发明的无机盐培养液成分简单，成本低，细菌生长快，培养24h即可用于毒素的大量提取，在水稻基腐病菌毒素分离纯化过程中，避免了使用大量有机溶剂，减少了粗毒素液浓缩步骤，方法简便，分离纯化效果好，获得的纯化毒素T3具有促进作物种子萌发后根芽生长、诱导水稻抗病防卫酶和抑菌植物病原细菌的显著作用，有望进一步开发为作物的促生剂、植物保护诱抗剂及广谱的植物病害杀菌剂等，为今后筛选降解毒素基因用于抗病基因工程的靶标奠定重要基础。

主权项

一种水稻基腐病致病细菌毒素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)水稻基腐细菌致病菌株用培养液恒温振荡培养，离心，取上清液即粗毒素液；(2)粗毒素液经树脂吸附柱层析分离收集流出液，采用甲醇为洗脱溶剂进行洗脱，并收集流分，将收集流分室温风干得到活性组分；(3)活性组分经聚酰胺柱层析获得的有活性毒素组分，制备薄层层析，获得活性最强组分；所述聚酰胺柱层析采用洗脱液为甲醇水溶液；所述薄层层析展开系统为甲醇∶水∶甲酸体积比为2∶1∶0.001；(4)活性最强组分制备薄层层析，获得水稻基腐病致病细菌毒素；所述制备薄层层析展剂系统为甲醇∶水∶甲酸为2∶3∶0.03。