反相柱层析制备小牛脾提取物注射液及制备方法

摘要

本发明公开一种反相柱层析制备小牛脾提取物注射液及制备方法，将原小牛脾提取物溶液进行反相柱层析纯化，纯化工艺简便，明显提高产品稳定性与药理活性的质量标准。打破了常规的吸附、洗脱离子交换柱层析方法，采用反相离子交换层析方法，减少了生产工艺流程，达到了提高产品质量标准的要求；本发明产品与原小牛脾提取液相比具有毒副作用小、色素杂质含量低，杂质含量降低，从而使毒副作用减小。高效液相色谱7号峰面积百分比由反相层析前的17.66％提高到层析后的51.82％，单位有效成分含量高。

主权项

一种小牛脾提取物溶液，是通过以下工艺制得的：将小牛脾提取物注射液经反相阴离子交换树脂层析，使用5～20mmol/ml、pH5～7的磷酸缓冲液或蒸馏水作为平衡液，收集具有升高白细胞作用的活力峰；减压蒸馏制得；所制得的提取物溶液为淡黄色澄清溶液；pH值为5.0～7.0；分子量4000‑6000道尔顿；加水制成每1ml中含多肽20ug的溶液，照分光光度法测定，在194nm的波长处有最大吸收；蛋白质：小牛脾提取物溶液2.0ml，加20％磺基水杨酸溶液2.0ml，混匀，不得发生浑浊；吸收度：小牛脾提取物溶液加水制成每1ml中含多肽20ug的溶液，在260nm与280nm波长处吸收度的比值应为2.0～2.5。