一种测定磷酸化多糖中磷含量的方法

摘要

本发明涉及一种测定磷酸化多糖中磷含量的方法。本发明通过配制磷酸根梯度标准溶液，以蒸馏水代替所述标准溶液作为空白对照，按同样条件处理，然后在824nm处测光吸收值，绘制标准曲线并建立回归方程；接着，将待测磷酸化多糖处理后先用混酸消解，再稀释定容配制样品溶液，取与被处理的磷酸梯度标准溶液相同体积的该样品溶液，以同样的条件处理并测光吸收值，根据回归方程算出待测样品溶液的磷酸根浓度，再进一步确定待测磷酸化多糖的含磷量。本发明方法测定时间较短、重复测定误差小，检测范围较宽、结果准确可靠，测定成本低而易于推广实施。

主权项

一种测定磷酸化多糖中磷含量的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)绘制标准曲线并建立回归方程：取一定质量的NaH2PO4定容于容量瓶中制备磷酸根浓度为10ug/ml的母液，再依次稀释制备0.2、0.5、1、2、3、4、5、7、9、10ug/ml的磷酸根梯度标准溶液，分别取上述梯度标准溶液3～5ml，加入1.8～3ml pH值为7.0的Tris缓冲液，摇匀后加入1.2～2ml浓度为125mg/ml的抗坏血酸水溶液，静置1～2min之后依次加入1.8～3ml浓度为1mol/L的H2SO4和0.6～1ml浓度为30mg/ml的钼酸铵溶液，混合均匀后在30～45℃的恒温水浴锅中保温20～30min，以蒸馏水代替所述标准溶液作为空白对照按同样条件处理，然后在824nm处测定光吸收值，以磷酸根浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线并建立回归方程；(2)样品的处理：在恒温箱中将磷酸化多糖待测样品在50～60℃下处理30～45min除去残余水分得到干物质样品，称取一定质量上述干物质样品，加入混酸，其中样品与混酸的比例为，重量∶体积＝1～2.5mg∶1ml，所述混酸中各成分的体积份数比为HNO3∶HClO4＝4∶1，静止过夜后在120℃中消解1～2小时至溶液澄清，得消解液A；(3)磷含量的测定：将消解液A在40～60℃、0.06～0.08MPa下减压浓缩蒸干得到干物质B，将干物质B定容在容量瓶中制备成B溶液，使其磷酸根浓度在0.2～10ug/ml范围内，取与步骤(1)中梯度标准溶液相同体积的所述B溶液并按照与与步骤(1)中相同的条件处理，即取B溶液3～5ml，加入到1.8～3ml pH值为7.0的Tris缓冲液中，摇匀后加入1.2～2ml浓度为125mg/ml的抗坏血酸水溶液，静置1～2min之后依次加入1.8～3ml浓度为1mol/L的H2SO4和0.6～1ml浓度为30mg/ml的钼酸铵溶液，混合均匀之后在30～45℃的恒温水浴锅中保温20～30min，以蒸馏水代替所述B溶液作为空白对照按同样条件处理，然后在824nm处测定光吸收值，每个样品测定三次光吸收值，取其平均值代入步骤(1)中所建立的回归方程，算出所定容样品B溶液的磷酸根浓度；然后，根据所定容样品B溶液的体积算出所定容样品B溶液中磷酸根含量，再根据所用磷酸化多糖干物质样品的重量算出所测磷酸化多糖干物质中磷酸根的含量，最后根据磷在磷酸根中的含量算出所测磷酸化多糖的磷含量。