罂粟碱的酶联免疫定量检测方法及其试剂盒

摘要

本发明提供了一种定量检测罂粟碱的酶联免疫分析方法，以罂粟碱的甲氧基苯环连接载体蛋白制成免疫全抗原并获得其高效价抗体为基础，用罂粟碱的甲氧基苯环连接另一载体蛋白制成的包被全抗原包被酶标板，封闭后，加入所述高效价抗体与试验样品液进行竞争性结合反应，然后加入酶标二抗，显色，检测罂粟碱的存在。通过定量检测吸光度值还可以进一步确定罂粟碱的含量。本发明还提供了一种依据该方法制备的简便易行的试剂盒。由于本发明采用了全新的全抗原合成方法，获得高效价抗体，使检测的灵敏度达到了0.06ng/mL。本发明的方法和试剂盒特异性强，灵敏度高，能快速简单的检测生物体液样品、药用制剂和植物、食品中罂粟碱含量。

主权项

1.一种测定罂粟碱含量的酶联免疫分析方法，包括如下步骤：(1)活化罂粟碱的苄基甲氧基，分别与不同的载体蛋白偶联制成免疫全抗原和包被全抗原，制备全抗原的步骤具体如下：1-1.罂粟碱在HBr水溶液中加热回流生成苯环3位或4位的单脱甲基罂粟碱；1-2.苯环3位或4位的单脱甲基罂粟碱在强碱条件下经卤代羧酸活化生成单脱甲基罂粟碱-O-羧烷基醚；1-3.单脱甲基罂粟碱-O-羧烷基醚经N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺作用与载体蛋白偶联成全抗原；(2)用免疫全抗原免疫动物，获得多克隆抗体；(3)用包被全抗原包被酶标板；(4)封闭后，加入上述多克隆抗体与待测样品的混合液进行竞争性结合反应，同时以多克隆抗体与标准罂粟碱溶液的混合液作为参比；(5)加入酶标二抗；(6)加底物显色，终止反应后目测即可得到罂粟碱的大致含量。