一种定向生物合成GAMG的方法

摘要

本发明为一种定向生物合成GAMG的方法，属于生物合成与生物转化技术领域。本发明的方法是利用产紫青霉菌在发酵培养基中生产相应的β-D-葡萄糖醛酸苷酶，然后将所获的β-D-葡萄糖醛酸苷酶加入含有甘草酸底物的转化液中，在酶的作用下定向水解甘草酸，获得GAMG粗品，再经有机溶剂萃取、树脂吸附、纯化得到GAMG产品。本发明用微生物酶做催化剂，反应效率高，且无污染；步骤简单，成本低；产物单一，纯度高。

主权项

1、一种定向生物合成GAMG的方法，其特征在于具体合成步骤如下：1)将产紫青霉菌接入种子培养基中，20～45℃，120～250r/min摇床培养18～45小时；再将种子液加入到发酵培养基，20～60℃，100～300r/min发酵72～120小时；其中种子液与发酵培养基的体积比为1～15∶100；所述的种子培养基为：每升培养基含有甘草酸0.01～10g，葡萄糖0.1～5g，NH4NO30.1～10g，KH2PO40.03～3g，MgSO4·7H2O 0.015～1.5g，KCl 0.015～1.5g，FeSO4·7H2O 0.001g，调pH3.0～8.0；种子培养基需在高压灭菌锅中110～125℃灭菌10～30min；所述的发酵培养基为：每升培养基含有甘草酸0.01～10g，NH4NO30.1～10g，KH2PO40.03～3g，MgSO4·7H2O 0.015～1.5g，KCl 0.015～1.5g，FeSO4·7H2O0.001g，调pH3.0～8.0，发酵培养基需在高压灭菌锅中110～125℃灭菌10～30min；2)将发酵后的发酵液加入到转化液中，25～45℃下搅拌1～25小时，用高效液相色谱(HPLC)测甘草酸含量，当甘草酸量保持1～5小时不变时终止反应；发酵液与转化液的体积比为1～50∶100；3)将上步反应后的转化液3000-10000r/min离心5-20分钟，除去菌体，取上清液进行减压浓缩，然后用非极性大孔树脂进行吸附，用浓度为40-80％的乙醇溶液进行洗脱，洗脱液经减压浓缩，即可得到GAMG样品；所述的转化液可以是以下任意一种：①每500ml浓度为0.05～0.2M pH为3.6～5.8的醋酸钠缓冲液加入1～50g甘草酸；②每500ml浓度为0.05～0.2M pH为5.7～8.0的磷酸钠缓冲液加入1～50g甘草酸；③每500ml蒸馏水加入1～50g甘草酸。