哺乳动物细胞无载体固定化培养方法

摘要

本发明公开了一种哺乳动物细胞无载体固定化培养方法，包括以下步骤：(1)促使哺乳动物细胞在悬浮培养条件下形成细胞团；(2)控制细胞团的平均粒径；(3)利用细胞团的自然沉降和旋转过滤器截流细胞团，更换培养基或连续灌注培养基；(4)使细胞团松散、解聚；(5)使自细胞团解聚的游离细胞再形成细胞团，放大培养规模。本发明的优点在于：①悬浮培养体系中所形成细胞团的形状规则、大小较均一，细胞团的平均粒径控制在小于300μm的范围内；②细胞团解聚、游离细胞再集聚成团的条件温和、可控；③哺乳动物细胞培养的活细胞密度≥1×10⁷ells/ml、细胞活力≥90％；④可节省购买多孔微载体的动物细胞培养成本；⑤便于监测培养过程中的细胞生长，细胞培养规模放大容易。

主权项

1. 哺乳动物细胞无载体固定化培养方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)促使哺乳动物细胞在悬浮培养条件下形成细胞团：调整培养基中的Ca2+浓度为500～2000μM，血清浓度为1～5％v/v，细胞接种密度为2～6×105cells/ml，搅拌速度为25～50r/min；(2)控制细胞团的平均粒径：提高搅拌速度至50～120r/min，控制细胞团的平均粒径分布在300μm的范围内；(3)利用细胞团的自然沉降和旋转过滤器截流细胞团，更换培养基或连续灌注培养基；(4)使细胞团松散、解聚：调整培养基中的Ca2+浓度为0μM，血清浓度为1％v/v，搅拌速度为50～100r/min、在培养基中加入浓度为500～750IU/ml的肝素；(5)使自细胞团解聚的游离细胞再形成细胞团，放大培养规模：调整培养基中的Ca2+浓度为500～2000μM、血清浓度为1～5％v/v、细胞接种密度2～6×105cells/ml，搅拌速度为25～50r/min；所述哺乳动物细胞为贴壁依赖性生长的哺乳动物细胞。