一种烟草黑胫病菌接种体的制备方法

摘要

本发明公开了一种烟草黑胫病菌接种体的制备方法。烟草黑胫病菌菌丝块在28℃下恒温培养5～6天，培养物置于液体培养基中，150转/分钟、28℃恒温培养7～8天，按3％～5％的体积比将液体菌液置于固体培养基中，在28℃下恒温培养10～12天，合格的固体培养物破碎成菌丝块，再与粗米糠、粗麦麸混匀，平铺，通风晾干，待水分降至35％～40％时，即为所需的烟草黑胫病菌接种体。运用该技术可缩短培养时间10～15天，培养获得的接种体容易分散，且有效侵染数量大，具有扩大培养的潜力，污染杂菌少。本发明操作简便，成本低廉，具有良好的应用前景。

主权项

1、一种烟草黑胫病菌接种体的制备方法，包括以下步骤:(1)从发病田块中采集病株，经过分离、纯化、致病力筛选测定，获得强致病力病菌，菌种采用菌丝块水浸法置于10℃条件下恒温保存，备用；(2)将烟草黑胫病菌菌丝块移到试管平板培养基上，在28℃下恒温培养5～6天，选择菌丝纯白色、在平板表面形成一层较致密菌丝层的培养物，用作液体培养菌种；所述的平板培养基配方为:燕麦片30g，琼脂17～20g，蒸馏水1000ml，pH自然；(3)用解剖刀切取烟草黑胫病菌菌丝块置于液体培养基中，每100毫升培养液接种菌丝2～4块，150转/分钟、28℃恒温培养7～8天；所述的液体培养基配方为:燕麦片30g，蒸馏水1000ml，pH自然；培养得到的液体菌液要求:菌丝白色、菌液不浑浊，菌丝不成团，镜检已产生游动孢子囊，并发现液体中有大量带有鞭毛的游动孢子，每毫升孢子含量在105个以上；(4)按3％～5％的体积比将液体菌液置于盛有固体培养基三角瓶中，在28℃下恒温培养10～12天，所述的固体培养基配方为:粒径1～3mm的粗米糠和粗麦麸以8:2的质量比混匀，加入45％的清水，充分混匀；培养得到的固体培养物要求:菌丝长满整个固体基质，菌丝灰白色，菌丝低温诱导，镜检可产生游动孢子囊，液体中有大量带有鞭毛的游动孢子，每毫升孢子含量在105个以上；(5)将合格的固体培养物破碎成0.5～1cm×0.5～1cm大小的菌丝块，再加入三分之一质量比的新鲜、干燥粗米糠、粗麦麸；米糠和麦麸按8:2的质量比混匀，搅碎、混匀，平铺，通风晾干2～3天，待水分降至35％～40％时，即为所需的烟草黑胫病菌接种体。