PRODUCTION DE PLASMIDES ET EXPRESSION DE PROTEINES RECOMBINANTES DANS DES CELLULES CULTIVEES SANS ANTIBIOTIQUES

摘要

La présente invention concerne une cellule mutée telle qu'une bactérie ou une levure, dans laquelle le gène thyA codant la thymidylate synthase comporte un codon non sens, de préférence le codon ambre, ledit codon non sens remplaçant un codon codant un acide aminé et entraînant un arrêt de la traduction du gène thyA et l'auxotrophie de la cellule pour la thymidine. Avantageusement, le gène endA codant l'endonucléase 1 et/ou le gène recA codant la recombinase est inactivé dans ladite cellule mutée. L'invention concerne également un plasmide d'expression comprenant un transgène et une séquence de gène structural d'ARNt suppresseur comprenant un anticodon capable de s'apparier au codon non sens du gène thyA et qui est spécifique d'un acide aminé capable de restaurer la traduction du gène thyA muté et d'obtenir ainsi une protéine de type sauvage ou mutée possédant une activité thymidylate synthase. Un procédé de multiplication du plasmide d'expression est également revendiqué.