一种具有抗氧化活性的发菜细胞及发菜提取物的制备方法

摘要

本发明涉及一种具有抗氧化活性的发菜细胞及发菜提取物的制备方法，能够获得有效清除超氧阴离子自由基和羟自由基的发菜细胞粉、胞外多糖和细胞提取液。该制备方法是将自养和混养的发菜细胞研磨粉碎获得细胞粉，从自养和混养的发菜细胞培养液中提取自养和混养发菜胞外多糖，取细胞粉加入磷酸盐缓冲液，反复冻融五次离心取上清液得到细胞提取液。本发明所得的发菜细胞粉、胞外多糖和细胞提取液具有清除超氧阴离子自由基的活性，细胞提取液具有清除羟自由基的活性，是潜在的天然抗氧化剂和功能性食品。

主权项

1.一种具有抗氧化活性的发菜细胞及发菜提取物的制备方法，其特征在于：制备方法的步骤是：(1).制备发菜细胞培养液：采用BG11培养基进行液体悬浮培养，在20～30℃培养25～35d，每天光照时间10～15h，得到发菜细胞培养液；(2).制备发菜细胞粉：将发菜细胞培养液在4500～5500r/min、离心10～20min得到细胞沉淀，收集细胞冷冻干燥，研磨粉碎即得到发菜细胞粉，3～5℃密封保存备用，上清液用来提取胞外多糖；(3).提取发菜胞外多糖：将上清液超滤浓缩，采用截留分子量为10000的中空纤维膜超滤装置，对经预处理的上清液脱水浓缩并除去小分子物质。得到的浓缩液用3～5倍体积95％乙醇沉淀，3～5℃静置20～30h，离心得到沉淀即为发菜胞外多糖，冷冻干燥保存；(4).制备发菜细胞提取液：取备用的发菜细胞粉，加入使其浓度相当于20mg/mL的50mmol/L pH7.0的磷酸盐缓冲液，—20℃～4℃反复冻融五次，3～5℃ 8000～11000r/min离心10～20min，取上清液即为发菜细胞提取液，3～5℃保存备用。