用于鉴别活性氧类物质清除剂的方法和试剂盒

摘要

本发明涉及用于测定细胞内H₂O₂水平的方法和试剂盒，用于测定供试化合物是否具有清除活性氧类物质(ROS)的能力。本发明的方法和诊断试剂盒采用含有启动子的细胞，该启动子可被ROS诱导，例如根癌土壤杆菌的H₂O₂诱导性KatA启动子，该启动子用于驱动报道基因的表达。报道基因的表达水平与细胞内ROS、具体为H₂O₂的水平有相互关系。在细胞暴露于供试化合物时，无论是细胞内还是细胞外，如果ROS诱导性报道基因表达水平降低了，那么这说明供试化合物是ROS清除剂。本发明的方法还可以用于选择新的或改进的ROS清除剂，该方法是在细胞中表达供试清除剂的文库，该细胞表达来自ROS诱导性启动子的报道基因，然后选择ROS诱导性报道基因表达水平降低的那些细胞。表达来自ROS诱导性启动子的报道基因的细胞可以具有经过基因修饰的背景，以降低它们的天然存在的ROS清除能力。

主权项

1.指示化合物除去活性氧类物质(ROS)的能力的方法，包含：a)提供经过基因修饰的细胞，其具有组成型地升高的细胞内ROS水平，并包含与报道基因可操作连接的ROS诱导性启动子，其中该报道基因相对于其可操作连接的启动子而言是异源的；b)使该细胞暴露于化合物；和c)在暴露于化合物时，测量细胞中ROS诱导性报道基因表达的变化；其中ROS诱导性报道蛋白表达的降低表明该化合物能够除去ROS。