一种溴氰菊酯人工抗原的合成方法及测定方法

摘要

本发明公开了一种溴氰菊酯人工抗原的合成方法，它包括(1R，3R)－3－(2，2－二溴乙烯基)－2，2－二甲基环丙基甲酰氯的合成、3－(4－硝基苯氧基)苯甲醛的合成、[3－(4－硝基苯氧基)苯基]氰基甲醇的合成、(1R，3R)－3－(2，2－二溴乙烯基)－2，2－二甲基环丙基甲酸[3－(4－硝基苯氧基)苯基]氰基甲酯的合成、人工半抗原(1R，3R)－3－(2，2－二溴乙烯基)－2，2－二甲基环丙基甲酸[3－(4－氨基苯氧基)苯基]氰基甲酯(称为DM)的合成和人工抗原的合成步骤，人工抗原的测定。

主权项

1、一种溴氰菊酯人工抗原的合成方法，其特征在于所述合成方 法包括下列步骤： 1)、(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲酰氯的合 成：向反应器中加入含30g(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环 丙基甲酸(0.1mol)的三氯甲烷溶液30ml和0.4mol的氯化亚砜28ml， 油浴条件下控温60-65℃反应2h，除去溶剂和氯化亚砜，得到黄色油 状产品(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲酰氯； 2)、3-(4-硝基苯氧基)苯甲醛的合成：在50ml的反应瓶中加入 2.68g3-羟基苯甲醛(0.022mol)、3.78g对硝基氯苯(0.024mol)和10ml 二甲基甲酰胺(DMF)，搅拌溶解，加入3.30g(0.024mol)无水碳酸钾， 油浴控温120℃，反应2小时至化合物三羟基苯甲醛反应完全(薄层 色谱跟踪)；趁热滤出固体并用少量DMF洗涤，滤液浓缩后得黑色固 体；所得粗产品用硅胶柱(CH₂Cl₂)脱色得黄色粉末3-(4-硝基苯氧基) 苯甲醛，甲醇重结晶； 3)、[3-(4-硝基苯氧基)苯基]氰基甲醇的合成：在50ml的反应瓶 中，加入4.90g(0.020mol)3-(4-硝基苯氧基)-苯甲醛、12ml氯仿溶液 和0.64g(0.002mol)碘化锌，氮气保护；混合物冰浴冷却后，加入 2.2g(0.022mol)的三甲基氰基硅烷，反应半个小时，撤去冰浴，室 温搅拌2小时至化合物3-(4-硝基苯氧基)苯甲醛反应完全(薄层色谱 跟踪)后，将反应液转入250ml锥形瓶中；向反应混合物中加入甘醇 二甲醚(60ml)的盐酸溶液(15ml，3mol/l)，剧烈搅拌5min，加60ml 水稀释，氯丁烷萃取两次；有机相由无水硫酸镁干燥，蒸馏得到黑色 油状物氰基醇；产品溶解(CH₂Cl₂)后，硅胶柱(30g)淋洗(正己 烷/二氯甲烷，4∶1)，脱色纯化得浅黄色油状物[3-(4-硝基苯氧基)苯基] 氰基甲醇； 4)、(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲酸[3-(4-硝 基苯氧基)苯基]氰基甲酯的合成：步骤3得到的氰基醇(2.7g)在10ml 氯仿溶液冰浴搅拌下，加入步骤1得到的酰氯(3.5g)的氯仿溶液 (6ml)，完毕后滴加1ml吡啶(1.25mmol)的氯仿溶液(3ml)；室温 搅拌30min后，混合物依次用水、1mol/LHCl、饱和的NaHCO₃洗涤， 所得料液用无水硫酸镁干燥，蒸馏得粘稠油状物，产品用硅胶(60g) (10-100％石油醚/乙酸乙酯)柱层析，得产品(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯 基)-2，2-二甲基环丙基甲酸[3-(4-硝基苯氧基)苯基]氰基甲酯，为白色 固体； 5)、人工半抗原(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲 酸[3-(4-氨基苯氧基)苯基]氰基甲酯的合成：反应器中，将SnCl₂(4.3g， 19.06mmol)加入到(1R，3R)-3-(2，2-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基甲 酸[3-(4-硝基苯氧基)苯基]氰基甲酯(2.10g，3.81mmol)的乙醇(20mL) 溶液中；氮气保护下，控温70-75℃搅拌反应8.0h，冷却后用水稀释， 加入乙醚和C盐(3.2g)溶液，然后分开15次加入固体NaHCO₃8.0g， 过滤料液，所得固体用乙酸乙酯洗涤，有机相水洗，无水硫酸钠干燥 后蒸馏得到红色油状物，产品用硅胶(40g)(25-100％石油醚/乙酸乙 酯，)柱层析，得到浅黄色固体，为半抗原，称为DM； 6)、人工抗原的合成：称取半抗原DM0.0261g(0.05mmol)放入 50ml小烧杯中，冰浴条件下加入300μL无水乙醇，搅拌溶解；然后 向溶液中加入1M盐酸0.5ml和0.2M的亚硝酸钠0.4ml，搅拌均匀， 最后逐滴滴加0.4mlN，N-二甲基酰胺到上述反应液中； 称量45mg的牛血清白蛋白(Bovineserumalbumin，以下称BSA) 放入50ml小烧杯中，加入5ml硼酸(0.2M)缓冲溶液(ph＝8.7)和1.2ml N，N-二甲基酰胺的混合液溶解；冰浴条件下，将具有活性的半抗原溶 液逐滴的加入到搅拌中的蛋白质中，50min滴加完毕；反应混和液在 冰浴下搅拌继续反应60min，反应完全后装入透析袋中，4℃下，磷酸 缓冲盐溶液(ph＝7.4)透析72h；离心，取上清液得人工抗原，称为 DM-RSA。