发明名称 |
降低实时荧光PCR仪器定量分析系统误差的分析方法 |
摘要 |
本发明公开了一种降低实时荧光PCR仪器定量分析系统误差的分析方法及应用,用荧光强度R<SUB>n</SUB>达到设定的阈值时模板的扩增时间t<SUB>n</SUB>为测量指标,按式lnX<SUB>0</SUB>=-ln(1+E)(t<SUB>n</SUB>/t<SUB>c</SUB>)+lnK计算X<SUB>0</SUB>值,绘制lnX<SUB>0</SUB>~t<SUB>n</SUB>的标准曲线,再计算出样品模板的初始拷贝数,测量t<SUB>n</SUB>值时,在仪器中设置连续扫描测量模式,对荧光信号强度进行实时检测,设定在每次循环的模板延伸阶段中,每0.01秒~10.00秒的范围内选定特定的时间间隔对反应管中的荧光信号强度R<SUB>n</SUB>检测一次,得动力曲线R<SUB>n</SUB>~t,所达到阈值的荧光信号对应的时间为t<SUB>n</SUB>值,解决了现有分析方法系统误差大等问题,广泛应用研究基因表达、基因工程、药物疗效、病原体检测和转基因成分检测等领域。 |
申请公布号 |
CN1269968C |
申请公布日期 |
2006.08.16 |
申请号 |
CN200410051557.4 |
申请日期 |
2004.09.16 |
申请人 |
邓平建;杨冬燕 |
发明人 |
邓平建;杨冬燕 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01);G01N21/64(2006.01);G01N21/84(2006.01) |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01) |
代理机构 |
深圳市中知专利商标代理有限公司 |
代理人 |
汪明曙 |
主权项 |
1、一种降低实时荧光PCR仪器定量分析系统误差的分析方法,分析过程中包括合成一对引物和一个荧光探针,和使用所述的引物、探针及其它聚合酶链式反应成份组成荧光聚合酶链式反应体系,从待测标本中提取DNA或是提取RNA然后逆转录成cDNA,加入前述的反应体系中,经混合后进行PCR扩增和荧光信号测定,其特征在于:(1)用荧光强度Rn达到设定的阈值时模板的扩增时间tn为测量指标进行实时荧光定量分析,tn和lnX0符合式(1)表达的线性关系:lnX0=-ln(1+E)(tn/tc)+lnK………(1)式(1)中,E为扩增效率,K为常数,X0是参与扩增反应的每种模板的初始拷贝数,tc是设定的实时荧光PCR每次循环所用的时间;以已知X0的标准样品测量tn,制作lnX0~tn的标准曲线,并测定样品的tn,再从标准曲线上计算出样品模板的初始拷贝数;(2)测量tn值时,在实时荧光PCR仪器中设置连续扫描,对PCR反应管的荧光信号强度进行实时检测,设定在每次循环的模板延伸阶段中,在每0.01秒~10.00秒的范围内选用特定的任意时间间隔对反应管中的荧光信号强度Rn检测一次,得仪器自动记录的其与时间t的动力学曲线Rn~t,曲线上出现达到阈值的荧光信号所对应的时间,即为相应的tn值。 |
地址 |
518020广东省深圳市罗湖区田贝一路21号 |