重组人生肝素的制备方法及其在制备抗肝损伤药物中的用途

摘要

本发明为重组人生肝素(hepassocin，HPS)的制备方法及其在制备抗肝损伤药物中的应用，属生物产品的生产方法及用途领域。在获得人HPS cDNA之后，将此cDNA插入原核表达载体，构建原核高效表达工程菌，在此基础上建立了一套工程菌的诱导表达、包涵体的分离与裂解、HPS的体外复性和分离纯化工艺。利用此工艺能最终得到具有生物学活性的HPS纯品，实现HPS的工业化生产；本发明还提供了HPS在制备抗肝损伤药物中的用途。

主权项

1.一种制备人生肝素(human hepassocin，HPS)的方法，其特征为利用温度诱导型表达载体在原核细胞中实现HPS的高效表达，采用稀释方法在变性剂介导下实现HPS的体外复性，该方法包括：(1)将HPS的cDNA克隆到温度诱导型原核表达载体中，构建HPS表达载体；(2)用HPS表达载体转化感受态大肠杆菌，构建HPS基因表达工程菌；(3)30℃条件下培养HPS基因表达工程菌，42℃条件下诱导HPS表达；(4)分离HPS包涵体，用变性剂裂解HPS包涵体；(5)用稀释方法在变性剂介导下实现HPS的体外复性；(6)用Q Sepharose Fast Flow离子交换柱层析实现对HPS的纯化。